扁桃斑鸠菊总黄酮提取及其体外抗肿瘤活性研究

扁桃斑鸠菊(Vernonia amygdalina Del.)(南非叶)为菊科斑鸠菊属植物,原产于热带非洲,该植物既可入药,又是当地人广泛食用的蔬菜。南非叶具有很多生物活性成分,如皂苷、萜类、类固醇、生物碱、香豆素类、黄酮类、酚酸类、木酚素、氧杂蒽酮、蒽醌类和倍半萜等。研究发现南非叶具有防癌、抗癌、抗菌、抗突变等多种效用,其主要成分及功效研究是近年来药物学家关注的热点。其中,黄酮类成分的药效显著,通过多种靶向、多样化通道用于治疗肝癌、乳腺癌、宫颈癌、白血病等研究已经取得一定的成果,继续扩大抗癌谱的研究,对有效促进其药用价值的开发与利用起重要的作用。作为常见的消化道肿瘤,全球范围内食管癌年平均死亡人数大概30万左右,中国也是该病的高发国家。虽南非叶对癌症研究较多,但是对食管癌效应研究尚未见有研究报道。本研究以福建农林大学实验田保存的南非叶为原料,分离提取得总黄酮,对其抑菌活性进行研究,并以食管癌ECA109细胞为研究对象,考察其体外抗肿瘤活性,并对其作用机理进行探索。主要研究内容及结果如下:1.采用超声提取法提取南非叶总黄酮,取南非叶粉末(250 g),在50℃下,采取优化后条件超声时间51 min、乙醇浓度75%、液料比40:1 mL/g进行提取,提取液经减压浓缩后石油醚萃取,水相部静置24h后以HPD-722大孔吸附柱吸附,水脱糖除杂,70%乙醇洗脱,减压浓缩后冷冻干燥得提取物南非叶总黄酮15.33 g,提取物总黄酮含量为 192mg/g。2.在最适条件下对南非叶总黄酮进行提取分离,得南非叶总黄酮。对其进行抑菌实验,其抗菌活性研究中:对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌三种细菌均有一定的抑制作用,尤其对大肠杆菌的抑制作用尤为明显。3.采用CCK8法筛选抗肿瘤细胞,结果表明南非叶总黄酮对人肝癌细胞(HepG-2)、人食管癌细胞(ECA109)、人胃癌细胞(BGC-823)和人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)4种肿瘤细胞均具有较强的抑制活性,其中对人食管癌ECA109细胞的抑制增殖活性最强,并呈一定的量效关系与时效关系,作用时间72小时,最高抑制率达到86.9%。4.以食管癌ECA109细胞为研究对象,进一步研究南非叶总黄酮体外抗肿瘤作用机制。通过倒置显微镜观察细胞形态,发现细胞数目减少,细胞呈现胞质回缩、折光性强、细胞缩小等形态学;采用PI单染流式细胞法检测ECA109细胞凋亡,其结果表明,细胞G0/G1期DNA含量降低,S期DNA和G2/M期含量明显增加,细胞周期阻滞在S和(G2/M期。可见,总黄酮可抑制食管癌ECA109细胞增殖,诱导细胞凋亡,从而有效控制肿瘤的发展。研究结果表明南非叶总黄酮对大肠杆菌的作用较为明显。在体外对食管癌ECA109细胞具有较强的抑制作用,可诱导细胞凋亡。本研究为南非叶总黄酮治疗食管癌及抗癌新药研发以及后续的体外与毒理研究奠定基础,可望开发成一种新的抗癌药物。