雪松松针总黄酮的提取纯化及其体外抗肿瘤活性研究

目的:研究松科植物雪松属(Cedrus Trew)雪松Cedrus deodara(Roxb.)Loud.松针总黄酮的大孔吸附树脂富集纯化工艺及体外抗肿瘤生物效应,探究雪松松针总黄酮体外抗肿瘤作用机制。方法:采用乙醇回流法,提取雪松松针总黄酮,利用大孔树脂富集纯化,通过静态吸附-解吸法,以对雪松松针总黄酮静态吸附-解吸率、吸附量、解吸量为指标,从12种不同极性、孔径、比表面积大孔吸附树脂中,优选最佳树脂。之后对该树脂进行动态吸附-解吸附考察,通过各单因素试验,确定适于富集纯化雪松松针总黄酮的大孔树脂纯化工艺。选用人宫颈癌He La细胞株、人胃癌MKN45细胞株、人肺癌A549细胞株、人肝癌Hep G2细胞株及人胶质瘤SHG44细胞株,进行体外增殖抑制试验,从中筛选雪松松针总黄酮最敏感瘤株,通过细胞周期及凋亡研究,探讨其体外抗肿瘤作用机制。结果:以对雪松松针总黄酮静态吸附-解吸率、吸附量、解吸量为指标,通过静态吸附-解吸试验,筛选出最佳弱极性树脂HPD722;经动态吸附-解吸附考察,确定富集纯化雪松松针总黄酮的最佳工艺:上样液质量浓度2.85mg/m L,p H值4.0,上样量4BV,4BV蒸馏水除杂,2BV的70%乙醇解吸,实验重复3次,经纯化雪松松针总黄酮纯度由14.15%提高到54.28%,纯化3.84倍,回收率89.58%。体外增殖抑制研究揭示雪松松针总黄酮不同浓度对各肿瘤细胞均有增殖抑制作用,并具剂量依赖性,对人肺癌细胞株A549、人肝癌细胞株Hep G2作用48h后,IC50分别为211.39μg/m L和114.12μg/m L。结合MTT试验结果及IC50值,发现Hep G2细胞对雪松松针总黄酮最为敏感(P<0.05)。采用流式细胞仪开展细胞周期及凋亡研究,证实雪松松针总黄酮能够阻滞Hep G2肿瘤细胞于G0/G1期,并诱导其凋亡,从而发挥体外抑制肿瘤细胞增殖作用。结论:以静态吸附-解吸附及动态吸附-解吸附试验,通过考察上样液质量浓度、p H、最大上样量及除杂洗脱条件、不同体积分数乙醇解吸附、解吸附体积,建立HPD722富集纯化雪松松针总黄酮的最佳动态条件。体外增殖抑制实验表明雪松松针总黄酮不同剂量组对5株肿瘤细胞均有一定抑制作用,其中对Hep G2细胞抑制作用最为显著(P<0.05),此机制与雪松松针总黄酮阻滞Hep G2肿瘤细胞于G0/G1期且诱导其凋亡有关。