生猪肉中金黄色葡萄球菌的检测及耐药机制研究

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作者
周臣清
机构
[1] 华南理工大学
关键词
金黄色葡萄球菌; 抗生素耐药; MLST; 第一类整合子;
D O I
暂无
年度学位
2014
学位类型
硕士
导师
摘要
抗生素的滥用导致耐药性细菌的出现并泛滥,细菌的耐药性及其耐药基因可通过食物链从动物传播给人类,这对人类的健康造成直接威胁。本研究从广州市六家超市及三家农贸市场中采集110份生猪肉样品,根据国标GB4789.10—2010对样品进行金黄色葡萄球的分离及鉴定,采用纸片扩散法(K-B)进行抗生素敏感实验,用多位点序列分型(MLST)进行分子分型,采用PCR法验证MRSA并筛选检测第一类整合子及相关耐药基因盒,并探讨第一类整合子整合酶(IntI1)介导的耐药基因盒在不同菌种间的水平转移的研究。具体内容如下: 首先按照随机采样法采集生猪肉样品110份,其中生鲜瘦肉50份,排骨29份,内脏类31份,按照国标法分离鉴定金黄色葡萄球菌,共有34份样品检出被金黄色葡萄球菌,每份阳性样品保存一株菌株,共得到34株金黄色葡萄球菌。其中50份生鲜瘦肉中检出16份,检出率为32%,29份排骨样品检出率最高为34.5%,内脏类样品检出率为25.8%,各类样品间检出率没有显著性差异。35份采自农贸市场的生猪肉样品检出10株金黄色葡萄球菌,检出率为28.6%,75份采自超市的猪肉样品中金黄色葡萄球菌的检出率为32.0%(n=24)。 对分离得到的34株菌株进行采用CLSI2012推荐的纸片扩散法抗生素敏感实验,耐药率由高到低依次为:青霉素100%、四环素88.2%、甲氧苄胺嘧啶76.5%、红霉素64.7%、克林霉素61.8%、利福平44.1%、头孢西丁38.3%、米诺环素35.3%、氯霉素17.6%、庆大霉素17.6%、诺氟沙星14.7%、呋喃妥因8.8%。MRSA检出率为38.3%(13/34),PCR验证mecA基因,对比药敏实验结果,符合率为76.9%(10/13)。本次实验共获得26种耐药表型谱,其中34株金黄色葡萄球菌对2种抗生素耐药的为5.9%(2/34),对3种抗生素耐药的为5.9%(2/34),对4种抗生素耐药的为11.8%(4/34),对5种抗生素耐药的为23.5%(8/34),多重耐药率高达52.9%(18/34),多重耐药菌株以对β-内酰胺类、大环内酯类和四环素类均耐药为主,占66.7%。 为了解不同菌株间是否同源,确定其相关性,对所有34株金黄色葡萄球菌进行多位点序列分型,所有34株菌共分成7个序列分型,分别为ST6(1/34)、ST7(16/34)、ST9(9/34)、ST59(1/34)、ST239(4/34)、ST2259(2/34),并获得一株等位基因谱为5-4-1-4-4-6-53的新型ST。本实验发现广州市售猪肉序列型以ST7为主,占47.1%,ST9次之,占26.5%,MRSA序列型发现有两种分别为ST9(6/10)和ST239(4/10)。 对第一类整合子整合酶基因PCR结果显示,34株菌中有5株菌PCR阳性,即第一类整合酶阳性率为14.7%。对整合酶阳性的菌株进行第一类整合子可变区扩增,结果显示有2株菌含携带大小不一的可变区序列,分别为frA17-aadA5,EstX基因盒。对含frA17-aadA5的菌株提取质粒,研究第一类整合酶介导的耐药基因盒在不同菌种间的水平转移:转化及自然转移,均取的了成功,提示第一整合子可以在不同菌间传播。 综上所述,实验显示生猪肉中金黄色葡萄球菌污染比较严重,且具有严重的抗生素耐药现象,ST7为主要的序列型号,第一类整合子存在于食源性金黄色葡萄球菌中,相关基因盒对菌株耐药发挥作用,且I类整合子可以在不同菌间传播。
引用
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共 43 条
[1]
4年食品中金黄色葡萄球菌的分离及耐药性研究 [J].
刘玉娥 ;
刘文羽 .
现代预防医学, 2014, 41 (06) :1094-1095+1098
[2]
上海市食源性金黄色葡萄球菌分布状况 [J].
李自然 ;
施春雷 ;
宋明辉 ;
史贤明 .
食品科学, 2013, 34 (01) :268-271
[3]
MecA基因在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素耐药中的作用.[J].黄辉;周建党;聂新民;易琦峰;.中南大学学报(医学版).2012, 06
[4]
细菌外排泵与抗生素耐药的相关性 [J].
孙渊 ;
査伟斌 ;
周芳 ;
吴晓兰 ;
张经纬 ;
王广基 .
中国临床药理学与治疗学, 2012, 17 (05) :593-600
[5]
食品中金黄色葡萄球菌及肠毒素检测与耐药性分析 [J].
马雪莲 ;
陈慧燕 ;
李毅 .
海峡预防医学杂志, 2011, 17 (05) :46-47
[6]
食品中金黄色葡萄球菌污染状况及其毒素检测 [J].
邓泽静 ;
李毅 ;
洪程基 ;
吴跃进 ;
陈慧燕 .
浙江预防医学, 2011, 23 (02) :92-93+96
[7]
环介导恒温扩增法(LAMP)检测金黄色葡萄球菌 [J].
李永刚 ;
王德国 ;
武建刚 ;
霍贵成 .
食品工业科技, 2010, 31 (01) :388-391
[8]
环介导等温扩增快速检测阳性血培养瓶中的金黄色葡萄球菌 [J].
周义正 ;
王昌富 ;
李向阳 ;
邱小燕 ;
付千钧 ;
杨锦红 .
中华医院感染学杂志, 2009, 19 (16) :2075-2077
[9]
大肠埃希菌中Ⅰ类整合子耐药基因的分析 [J].
杨维青 ;
刘晓峰 ;
黄震 .
中国抗生素杂志, 2009, 34 (07) :434-436
[10]
食品中金黄色葡萄球菌污染状况研究 [J].
索玉娟 ;
于宏伟 ;
凌巍 ;
贾英民 .
中国食品学报, 2008, (03) :88-93