羊肚菌酶提子实体多糖的抗氧化、降血脂和器官保护作用

羊肚菌(Morehella esculenta),属子囊菌门(Ascomycota)、盘菌纲(Pezizomycetes)、盘菌目(Pezizales)、羊肚菌科(Morchellaceae)、羊肚菌属(Morehella),是一种珍稀食药用菌,富含多糖、蛋白质、微量元素等多种活性物质。羊肚菌多糖(M.esculenta polysaccharides,MPS)具有降血脂、抗氧化和抗肿瘤等生物活性,但目前关于酶提羊肚菌多糖(Enzyme-assisted M.esculenta polysaccharides,EnMPS)未见报道。本课题采用布列可特-博曼设计(Plackett-Burman,PB)和响应面(Response surface methodology,RSM)试验等方法优化了羊肚菌子实体多糖的提取条件,测定了红分外光谱和单糖组成,分析了体外抗氧化、体内降血脂和器官保护作用。结果如下:MPS的提取优化:利用PB设计,从提取温度、醇沉温度、提取次数、提取时间、pH、料液比、乙醇倍数、乙醇浓度和乙醇沉淀时间9个因素中,筛选出了对多糖得率影响较为显著的3个因素,即醇沉时间,料液比,提取时间。运用RSM法确定了羊肚菌子实体多糖的最优提取条件,即醇沉时间12.06h、料液比1:30.02、提取时间3.00h,在此条件下,多糖理论得率为1.30%。为操作方便,在醇沉时间12.00h、料液比1:30、提取时间3.00h条件下,实际得率为1.26%。气相色谱(Gas chromatography,GC)和红外光谱分析:EnMPS由鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖构成,其质量分数分别为4.90%、16.82%、16.40%、54.42%和74.5%,摩尔比为1:3.76:3.05:10.13:1.39。MPS含有鼠李糖、木糖、甘露糖和半乳糖,其质量分数分别为2.19%、33.89%、17.37%和46.55%,摩尔比为1:16.92:7.23:19.36。EnMPS和MPS均具有多糖特性,且EnMPS和MPS均为呋喃糖。体外抗氧化活性检测:在600mg/L条件下,EnMPS清除超氧阴离子,羟基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基能力分别达到76.92±2.61%,66.74±2.56%和75.78±2.4%,MPS清除超氧阴离子,羟基和DPPH自由基能力分别达到62.85±2.58%,60.79±2.59%和58.47±2.2%。结果表明EnMPS和MPS具有较强体外抗氧化活性,且EnMPS的抗氧化活性明显高于MPS。降血脂和器官保护作用:通过检测小鼠血清酶的活性碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)、谷丙转氨酶(Alanine transaminase,ALT)和谷草转氨酶(AST,Aspertate transaminase),血清脂质含量水平肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酸酯(Triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(High-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和乳酸脱氢酶(Lactic dehydrogenase,LDH),肾脏指标含量尿素(UREA)、肌酐(CREA)和白蛋白(Albumin,ALB),肝脏抗氧化酶活性游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)和总抗氧化能力(Total antioxidant capacity,T-AOC)和脂质过氧化含量水平丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)发现,EnMPS可显著抑制高脂乳剂所诱导的高血脂小鼠中各项指标变化。小鼠肝脏和肾脏的病理学分析显示,EnMPS及MPS有保护肝脏和肾脏的作用。上述结果表明,EnMPS能改善高脂乳剂诱导的高血脂小鼠的氧化应激损伤,有望作为一种天然药物来降低血脂、抗氧化和保护肝脏和肾脏。