桑黄水溶性多糖的分离纯化及结构的初步研究

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作者
周勇
机构
[1] 吉林农业大学
关键词
桑黄; 多糖; 提取纯化; 结构分析;
D O I
暂无
年度学位
2007
学位类型
硕士
导师
摘要
本文对桑黄(Phellinus igniarius (L.:Fr.) Quél)菌丝体多糖的提取分离进行了研究,建立了菌丝体多糖和发酵液多糖的纯化路线,并对其中三种水溶性多糖的理化性质进行了测定。 本论文采用正交试验,分别研究了热水浸提法、微波辅助法和超声波法提取桑黄菌丝体粗多糖的最优工艺,根据极差分析和实验室实际情况确定了热水浸提法的最优工艺为浸提时间3小时、浸提3次、液料比50、浸提温度90℃,多糖提取率为2.10%;微波提取法的最优工艺为微波处理15min、液料比50、提取3次,提取率为4.18%;超声提取法的最优工艺为超声30min、提取2次、液料比60、温度60℃、频率60Hz,提取率为3.02%。以多糖损失率和脱蛋白率为衡量指标,选用了3种比较常见的方法:Sevag法、三氯醋酸法及三氯醋酸和酶结合法对桑黄水溶性粗多糖进行脱蛋白处理。结果为Sevag法、三氯醋酸法及三氯醋酸和酶结合法的脱蛋白率分别为82.4%、71.3%、79.6%,多糖损失率分别为51.5%、8.9%、9.8%。结果表明三氯醋酸和酶结合法最适合实验室范围操作,最佳工艺为三氯醋酸用量10%、作用15min、酶加入量1.2%。 将桑黄多糖依次采用分级醇沉、脱色、透析等分离纯化方法分别得到:菌丝体多糖组分PI1、PI2,其产率为13.5%、12.4%;发酵液多糖组分PI3,其产率为15.9%。经葡聚糖凝胶G-100层析柱分离得到组分PI11、PI21和PI31,多糖纯度为98.7%、99.5%和98.9%,再用反复冻融法和凝胶柱层析法证明此三种组分为分子量均一的纯多糖。 对三种纯多糖进行了理化性质的分析,三者在Molish反应中均呈阳性,红外光谱测定结果显示其都有多糖的特征吸收峰,证明其为糖,碘反应呈阴性,说明不含连续的α(1→4)糖苷键,且光谱显示其构型都为β型。不溶于乙醇、丙酮和乙醚等有机溶剂,但易溶于水,尤其易溶于热水。260nm及280nm处均无紫外吸收,表明其不含核酸和蛋白质。PI11、PI21和PI31的分子量分别为65000、30000和12000。通过气相图谱分析判断三种纯化多糖均含有木糖、甘露糖,岩藻糖,葡萄糖和半乳糖。PI11中木糖、甘露糖、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖的摩尔比为5.2:1:10.2:9.24:30.1;PI21中木糖、甘露糖、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖的摩尔比为0.08:1:4.6:6.9:14.1;P131中木糖、甘露糖、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖的摩尔比为2.3:1:6.4:22.1:19.8。 本研究的目的是为了建立一条符合实际、简便易行的桑黄水溶性多糖的提取分离、纯化的技术路线,并且得到一定量的纯化多糖,利用理化方法初步分析多糖的结构组成。所得出的结论可以为工业化提取多糖提供一套可行的方案,其结构的研究也为今后进一步探索多糖抗癌及其它药理作用的机理提供了理论依据。
引用
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共 53 条
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