瘢痕疙瘩发病机制初步探讨：siRNA沉默成纤维细胞PTGS2基因表达的实验研究

目的:研究瘢痕疙瘩的发病机理,在基因水平上探索防治瘢痕疙瘩的新途径。1.利用real time PCR验证特异性靶基因在瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞中的表达差异;2.利用siRNA沉默特异性表达基因,并在基因和蛋白水平验证干扰效果;3.用全基因组芯片检测siRNA沉默特异性表达基因后,成纤维细胞基因表达变化效果。 方法:1.瘢痕疙瘩组织与正常皮肤组织成纤维细胞的培养。2.利用RealTimeRT-PCR验证PTGS2、NFKBIA、CCNA2、MIF、EGFR和FDPS在瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞中的表达差异。3.成纤维细胞转染条件优化实验4.对筛选出的靶基因PTGS2进行siRNA干扰。5.在基因和蛋白水平验证siRNA沉默效果。6.用全基因组芯片检测成纤维细胞靶基因被siRNA沉默后基因表达变化。 结果:1.与前期研究所做的基因芯片结果对照,筛选出PTGS2基因与基因芯片结果一致,且差异明显。2.siRNA干扰后,PTGS2基因在mRNA和蛋白水平表达明显下调。3.成纤维细胞PTGS2基因沉默后全基因组芯片检测与沉默前相比,发生差异表达变化的基因,按1.5倍差异共有189个,其中上调115个,下调74个。按2倍差异共有14个基因,其中5个下调,9个上调。 结论:1.PTGS2基因与瘢痕疙瘩的发病机理有着密切的关系。2.siRNA干扰技术提供了在基因水平上探索防治增生性瘢痕及瘢痕疙瘩的新途径。