本文深入探索了酸水解、酶水解以及超声提取法提取甘草中异甘草素以及应用大孔吸附树脂和聚酰胺柱层析分离纯化异甘草素的工艺进行了系统研究。
1.确定反相高效液相色谱分析检测甘草中异甘草苷和异甘草素的色谱条件为
色谱柱为C18-ODS不锈钢色谱柱（250mm×4.6mm,5μm,HPLC Technology Ltd.日本）;检测波长λ=360nm;流动相甲醇:0.4%H3PO4（1:1）;柱温30℃;流速1.0mL/min;进样量10μL。
2.研究了酸水解和酶法水解提取甘草中异甘草素的工艺,对影响水解过程的各个因素进行研究,确定最佳工艺参数。
酸水解法提取异甘草素最佳工艺参数为:1mol·L-1盐酸,水解2h,水解温度90℃,液固比5:1。水解后碱中和pH至7,过滤后用80%乙醇提取滤渣,液固比10:1,超声20min,提取2次;乙酸乙酯萃取滤液,液液比1:1,萃取2次。酸水解法提取异甘草素的提取率为2.46‰,浸膏中异甘草素含量为3.01%。
纤维素酶水解法提取甘草中异甘草素工艺参数为:pH=7（自然水）;酶浓度0.4mg/mL;酶催化时间48h:酶液体积:原料为8:1（mL/g）;振荡培养箱（摇速）100r/m。酶法水解提取甘草中异甘草素的提取率为2.98‰,分别是酸水解法提取的1.21倍,是直接索氏提取和直接超声提取的11.07倍和10.38倍;浸膏中异甘草素含量为3.32%,分别是酸水解法提取的1.10倍,是直接索氏提取和直接超声提取的10.64倍和11.92倍。
3.确定了以酶法水解甘草原材料后,乙醇超声提取异甘草素的优化工艺条件为:80%乙醇,液固比10:1,超声10min,提取3次。提取率为3.11‰,浸膏中异甘草素含量为3.55%。
4.应用ADS系列大孔吸附树脂对异甘草素进行分离纯化,确定了最佳树脂ADS-F8吸附与解吸附工艺条件:吸附:pH=7,吸附温度20℃,流速1.5mL/min;解吸附:15%乙醇溶液100mL预洗脱除杂,然后以80%乙醇为洗脱剂,流速1.5mL/min。
在最佳的吸附与解吸附工艺条件下,异甘草素的吸附率为75.69%,解吸率为80.1%,异甘草素的回收率为60.6%,纯度由3.55%提高到27.77%,提高了7.82倍。
5.采用聚酰胺柱层析对树脂分离后的异甘草素样品进行分离,40%乙醇为洗脱液,异甘草素纯度由27.77%提高到78.67%,提高了50.9%,回收率为64.37%。
