柚皮素对急性免疫性肝损伤的保护作用

体内免疫平衡对于免疫系统发挥正常功能是非常必要的,激活不足会产生免疫逃逸;相反,激活过剩将产生自身免疫性疾病,甚至致命性的器质性损伤,急性免疫性肝损伤就是先天性免疫和获得性免疫失控的结果。尽管临床前和临床已经开展了大量的疾病机制研究并且发现了与炎症关系密切的内源性分子,但对急性免疫性肝损伤的治疗仍缺乏具体有效的方法。 黄酮类化合物柚皮素具有较强的清除自由基、抗氧化、抗菌、抗肿瘤等多种药理作用,本课题组发现其有很好的免疫调节作用,此作用是否能阻止急性炎症是我们探索的重点。在本课题中我们通过ConA和LPS诱导的小鼠免疫性急性肝损伤模型评价了柚皮素对肝损伤的保护作用,通过Jo2诱导的急性肝损伤模型、T淋巴细胞增殖和细胞亚群及细胞因子检测探索了柚皮素对肝损伤保护机制。 本文结果显示:ConA造模小鼠血清ALT和AST为1769.28U/L和1474.4U/L(正常对照为32.88和67.9),分别是正常小鼠的53.8和21.7倍;柚皮素ig200mg/kg治疗的小鼠血清ALT及AST为950.6 U/L和598.0 U/L,与未治疗的小鼠比较分别降低46.27%和59.44%。ConA造模小鼠血清TC和TG也较正常小鼠血清有明显的升高,而柚皮素治疗的小鼠血清TC及TG较未治疗小鼠血清有非常明显的降低。另外,肝组织切片HE染色显示,ConA造模小鼠肝脏组织紊乱,由中央静脉向四周呈严重的放射性的损伤,柚皮素治疗的小鼠与未治疗的小鼠比较,肝脏组织相对均一,肝损伤有明显不同程度的改善;Tunel检测表明小鼠经ConA造模后引起了肝脏大面积的凋亡,而经柚皮素治疗后的小鼠的肝脏有了非常明显的凋亡抑制作用。 在LPS诱导的急性肝损伤中,治疗组血清中IFN-γ的含量是0.29,未治疗组是1.02,柚皮素ig200mg/kg治疗组和ig100mg/kg治疗组的小鼠血清中TNF-α分别是0.307和0.405,是未治疗组的47.16%和62.21%;另外柚皮素治疗组血清中IL-6,TNF-α,IFN-γ,IL-1,IL-5等细胞因子较未治疗组均有明显的降低。 在Jo2致小鼠肝损伤模型中,未治疗组和柚皮素治疗组小鼠血清中ALT、AST含量未有明显的变化,重要的细胞因子如IFN-γ、TNF-α也无明显差异。相应的,柚皮素治疗对小鼠存活也没有得到任何的改善。 机制研究表明:体外无论用CD3或CD3+CD28刺激还是用ConA或PMA刺激,柚皮素给药组与未给药组相比,均能明显将T细胞阻滞在M1期,能明显地抑制T细胞的增殖。小鼠的T淋巴细胞体外经CD3刺激后,柚皮素40μmol/L、80μmol/L能抑制T细胞的增殖,但当加入IL-2时可以部分上解除柚皮素对T细胞的抑制作用。流式细胞仪结果显示,用柚皮素处理过的T淋巴细胞CD4、CD8中IL-4、IL-2、IFN-γ及TNF-α的含量均有显著的降低;CBA实验结果显示,柚皮素处理过的T淋巴细胞与未处理过的相比,其IL-1、IL-2、IL-5、IL-6、IL-10、IL-4、IL-17、TNF-α、GM-CSF、IFN-γ等重要的细胞因子分泌也均有不同程度降低。 综上所述,柚皮素对小鼠免疫性急性肝损伤有保护作用,其机制是直接抑制T淋巴细胞的激活,从而阻止了各种炎症因子的分泌达到减轻肝损伤的目的。