黄秋葵多糖提取纯化及体外抗氧化活性的探讨

黄秋葵(Abelmoschus esculentusl (L.) Moench)属锦葵科(Abelmoschus)秋葵属(Malvaceae)一年生植物,原产自非洲,于20世纪90年代初期引入我国内陆,目前在全国多个地区均有栽培,资源较为丰富。其果实含多种营养成分及生物活性物质,对其开展系统地研究开发,具有重要的经济价值和深远的社会意义。 目的： 以新鲜采摘的黄秋葵全草为原料,对黄秋葵多糖的提取分离、含量测定、一般理化性质和结构分析及体外抗氧化活性等方面进行较为系统的研究,为深层次开发和利用黄秋葵提供理论依据。 方法： 1.采用热水浸提法提取黄秋葵粗多糖(raw polysaccharides, RPS),采用蒽酮-硫酸法测RPS中多糖含量。 2.分别采用Sevag法、三氯乙酸(TCA)法和TCA-正丁醇法对RPS进行脱蛋白处理以及活性炭法、双氧水法对其进行脱色处理。利用DEAE-Cellulose52柱层析法对脱蛋白、脱色后的黄秋葵多糖进行进一步纯化。 3.利用溶解性测定、蒽酮-硫酸反应、考马斯亮蓝反应、碘-碘化钾反应及三氯化铁反应测定黄秋葵多糖各组分的一般理化性质,采用紫外分析法(UV)、红外光谱法(IR)对其结构进行初步解析。 4.对黄秋葵多糖各组分的体外抗氧化活性进行研究：用Fenton体系测定其清除羟基自由基(·OH)能力；邻苯三酚自氧化法测其对超氧阴离子自由基(O2-·)的清除能力；1,1-二苯基苦味酰基苯肼(DPPH)氧化法测其对DPPH自由基(DPPH·)的清除能力；同时测定黄秋葵多糖的还原能力及其对Fe2+诱导的卵黄脂蛋白过氧化反应的抑制作用。 结果： RPS中多糖平均含量为11.231%；TCA-正丁醇法脱蛋白效果较好,在相应实验条件下,蛋白质脱除率为73.05%,多糖保留率为83.74%；活性炭法脱色效果优于双氧水法,在相应实验条件下脱色率为86.25%,多糖保留率为66.07%；脱蛋白、脱色后的黄秋葵多糖经DEAE-Cellulose52柱层析后得到三个组分：RPS-1、RPS-2及RPS-3；三组分均为白色絮状固体,能溶于水,不溶于无水乙醇、丙酮等有机溶剂,蒽酮-硫酸反应阳性,考马斯亮蓝反应、碘-碘化钾反应及三氯化铁反应均为阴性；UV、IR分析结果显示RPS-1、RPS-2及RPS-3为具有乙酰胺基结构的B-多晶型酸性非蛋白多糖；RPS、RPS-1、RPS-2及RPS-3对·OH和DPPH清除能力较好,对02-·的清除能力较弱；具有一定的还原能力和良好的抗脂质过氧化能力；RPS的体外抗氧化能力强于RPS-1、RPS-2及RPS-3,而RPS-1、RPS-2及RPS-3对各考察指标表现出的活性大小并不完全相同；各样品在实验浓度范围内均呈现出较好的剂量效应关系。 结论： RPS-1、RPS-2及RPS-3均不含蛋白质、淀粉及多酚类物质,是具有乙酰胺基结构的B-多晶型酸性非蛋白多糖；三组分均具有一定的体外抗氧化活性。