枸杞多糖对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的保护作用及机制研究

肝纤维化(Hepatic fibrosis)是许多慢性肝病的共同病理基础,多种细胞因子、生长因子、基质及其降解酶类等均参与了肝纤维化的发生与发展。我国肝纤维化发病率越来越高,严重地威胁着宠物和人的健康。有研究证实,肝纤维化是一个可逆的病理过程,如果能在肝纤维化发病早期进行适当有效的治疗不仅能够阻止病情的恶化,甚至还可以逆转肝脏纤维化。因此寻求防治肝纤维化的有效药物具有重大的意义。枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysaccharides,LBP)是我国传统中药枸杞的重要活性成分,具有多方面的药理作用,能有效提高机体抗氧化物的活性、清除过多的自由基并调节机体免疫等。有研究表明,LBP能有效缓解大鼠的肝脏毒性,然而具体的缓解机制还鲜有报道。本试验在之前的研究基础上,采用四氯化碳(Carbon tetrachloride,CCl4)建立肝纤维化大鼠模型,研究了 LBP对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的保护作用,并进一步探讨其具体保护机制,主要研究内容如下:试验一.枸杞多糖对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的保护作用50只Wistar大鼠随机分为5组,每组10只,即空白对照组、CCl4模型组、LBP低剂量组、LBP中剂量组和LBP高剂量组。除空白对照组之外,所有大鼠用40%的CCl4橄榄油溶液灌胃,2mL/kg每周两次,持续八周诱导大鼠肝纤维化。LBP组是在模型组基础上分别用400 mg/kg、800 mg/kg、1600 mg/kg的LBP灌胃大鼠,每日一次,持续八周。实验结束后,观察LBP对大鼠生长性能、血清ALT、AST和ALP活性、肝组织病理变化及大鼠肝脏中TGF-β1、α-SMA和Col-I表达的影响。结果表明:LBP能有效改善模型组大鼠的精神状态及生长状况,升高其体重的增量并降低肝重和肝指数(P<0.05)LBP能明显降低CCl4诱导的大鼠血清中ALT、AST及ALP含量的升高(P<0.05)及肝纤维化病理损伤,LBP还能显著降低肝纤维化大鼠肝脏中TGF-β1、α-SMA和Col-I的mRNA表达,中、高剂量LBP的缓解作用更显著。这些结果表明:LBP能有效缓解CCl4诱导的大鼠肝损伤。试验二.枸杞多糖缓解CCl4诱导的大鼠肝纤维化的机制研究为了探究LBP缓解CCl4诱导的大鼠肝纤维化的具体机制,50只Wistar大鼠,随机分为5组,每组10只,试验分组同试验一,我们首先测定了大鼠肝脏中SOD、GSH-Px、GSH和MDA的含量。结果表明:与空白对照组相比,CCl4明显地降低了大鼠肝脏中SOD、GSH-Px和GSH的活性(P<0.05),显著地升高了 MDA的含量(P<0.05),与 CCl4 处理组相比,400mg/kg、800mg/kg、1600mg/kgLBP能有效提高纤维化大鼠肝脏中SOD、GSH-Px和GSH的活性,并显著降低MDA的含量(P<0.05),这些结果表明:LBP能显著提高肝纤维化大鼠体内抗氧化物的活性并抑制脂质过氧化。随后我们进一步测定大鼠肝脏中炎症因子TNF-α、IL-1β、MCP-1及TLRs/NF-κB通路相关分子TLR2、TLR4、MyD88和NF-κB的表达。结果表明:与空白对照组相比,CCl4能显著升高大鼠肝脏中炎症因子TNF-α、IL-1 β和MCP-1 mRNA的表达水平(P<0.05),这说明CCl4能促进机体的炎症反应,与CCl4模型组相比,LBP显著降低了 CCl4诱导的炎症因子的表达,其中中、高剂量LBP的缓解效果更显著(P<0.05)。除此之外,与空白组中健康大鼠相比,三种剂量的LBP均能显著降低CCl4诱导的大鼠肝脏中TLR2、TLR4、MyD88和NF-κB的mRNA表达水平及TLR2、TLR4和p-p65的蛋白表达水平(P<0.05),这些变化与炎症因子表达水平的变化及病理切片分析结果一致。这些结果表明LBP能有效缓解CCl4诱导的大鼠肝纤维化,其作用机制可能与抑制TLRs/NF-κB信号通路,抑制炎症因子的表达有关。