目的：肠易激综合症(IBS)是一组以持续性或间歇发作性腹痛、腹部不适伴排便习惯和大便性状异常为主要临床表现的功能性肠病。自1946年Dolhart最早命名IBS至今的50余年里,其病理生理机制一直未被阐明,有研究显示IBS的发病可能与肠道动力紊乱、内脏感觉超敏、感染及心理、应激、遗传等多方面的因素有关。目前研究最多的就是关于5-羟色胺转运体(Serotonin Transporter, SERT)基因多态性在IBS的发病和临床症状方面的作用机制。本课题主要探讨SERT基因多态性与SERT mRNA转录水平以及SERT表达量与5-HT的含量之间的相互关系,并在结肠黏膜超微病理水平上对IBS患者结肠粘膜进行观察,以便明确IBS的发病机制,为临床IBS患者制定个性化治疗方案提供理论依据。
方法：课题分为三部分进行。第一部分：SERT基因多态区及SERT mRNA表达
从受试者外周静脉血中提取DNA,通过PCR扩增SERT基因多态区,并对PCR产物进行电泳。取受试者的新鲜结肠粘膜组织提取RNA,应用Real time PCR技术建立SERT基因多态性与转录水平的联系。从而确定不同基因型及IBS不同亚型mRNA的转录水平。
第二部分：5-HT阳性细胞免疫组织化学和SERT原位杂交
分别应用免疫组织化学方法和原位杂交方法检测IBS不同亚型患者结肠粘膜5-HT阳性细胞和SERT的表达。第三部分：IBS患者结肠粘膜细胞电镜超微结构的观察
用电子显微镜观察IBS不同亚型患者结肠粘膜超微结构的变化情况。采用x2检验、方差分析分别对IBS组与健康对照组、IBS各亚型之间的5-HTTLPR区基因多态性、结肠组织SERT mRNA转录水平以及与IBS躯体化症状作统计分析。采用x2检验对IBS不同亚型患者结肠粘膜5-HT阳性细胞和SERT的表达率进行统计分析。对方差不齐数据采用Dunnett's T3和Dunnett's C进行矫正。
结果：SERT基因5-HTTLPR多态性可以影响结肠组织SERTmRNA转录水平,而SERTmRNA转录水平又通过对5-HT水平的调控,可能最终会影响IBS躯体症状。
第一部分：5-HTTLPR多态性位点等位基因为L和S；组成3种基因型L／L,L／S和S／S。5-HTTLPR基因型在IBS和对照组之间分布无统计学意义；IBS各亚型之间分布有统计学意义：C-IBS组L／L频率显著高于对照组、D-IBS组和A-IBS组,但是D-IBS和A-IBS组分布无统计学差异；D-IBS组S／S频率显著高于C-IBS组,但是在D-IBS和A-IBS组,C-IBS和A-IBS组及D-IBS和对照组分布无统计学差异。L／L基因型mRNA转录水平明显高于L／S和S／S基因型,而L／S和S／S基因型：mRNA转录水平没有明显差异；C-IBS的SERT mRNA的转录水平明显高于IBS、D-IBS、A-IBS和对照组。
第二部分：5-HT阳性细胞在D-IBS、A-IBS、对照组和C-IBS中的表达率依次降低。而SERT mRNA在D-IBS、A-IBS、对照组和C-IBS中的阳性表达率依次升高。
第三部分：IBS患者结肠黏膜杯状细胞、神经内分泌细胞、肥大细胞及浆细胞的变化,可能在IBS症状发生的神经免疫、内脏感觉过敏以及肠道感染等机制中有一定的作用。
结论：SERT基因5-HTTLPR多态性会影响SERT mRNA的转录水平,进而影响对5-HT的调控从而产生IBS不同躯体症状。而且在超微病理水平上,IBS患者结肠黏膜杯状细胞、神经内分泌细胞、肥大细胞及浆细胞均有变化,提示IBS症状发生的神经免疫、内脏感觉过敏以及肠道感染等机制。
