炎症因子基因DNA甲基化与原发性高血压的关联性研究

目的:1、探讨原发性高血压患者与正常对照间炎症因子基因TLR2、IL6和IFN-γ启动子DNA甲基化水平的差异;2、研究性别、吸烟和饮酒等环境因素对炎症因子基因DNA甲基化差异的影响;3、探讨炎症因子基因启动子Cp G位点的DNA甲基化差异对原发性高血压的临床诊断价值。方法:1、运用多阶段抽样的方法纳入研究对象,进行人口学特征、环境因素的问卷调查、体格检查及实验室检查,最终确定按性别、年龄1:1匹配的96个新发病例和96个对照,并获得192个研究对象的基线资料、血液样本及血生化指标;2、将采集的血样进行DNA的提取、亚硫酸盐修饰以及运用焦磷酸测序法检测血液样本中炎症因子基因TLR2、IL6和IFN-γ启动子DNA甲基化水平;3、通过分别比较检测的炎症因子基因在两组间的甲基化程度,分析甲基化程度的差异,了解环境因素对甲基化及原发性高血压发病的影响,并用Logistic回归校正混杂因素。结果:1、各基因甲基化水平比较:(1)TLR2基因:新发病例组与正常对照组相比,新发病例组TLR2启动子Cp G6位点甲基化水平降低(对照组VS新发病例组(%):Cp G6:8.30±4.13 VS 3.58±3.64,OR(95%CI)=0.91(0.861～0.979),adjusted P=0.009);(2)IL6基因:新发病例组与正常对照组相比,新发病例组IL6启动子Cp G3位点甲基化水平降低(对照组VS新发病例组(%):Cp G3:57.45±8.29VS 51.52±6.18,OR(95%CI)=0.90(0.838～0.965),adjusted P=0.004);(3)IFN-γ基因:新发病例组与正常对照组相比,新发病例组IFN-γ启动子Cp G2位点甲基化水平降低(对照组VS新发病例组(%):Cp G2:10.50±0.92VS 9.23±0.83,OR(95%CI)=0.64(0.480～0.856),adjusted P=0.003)。2、对照组中性别间比较:(1)TLR2基因:女性TLR2启动子Cp G6位点甲基化水平偏高(男性VS女性(%):Cp G6:7.31±1.49 VS 8.94±5.09,adjusted P=0.013);(2)IL6基因:女性IL6启动子Cp G2位点甲基化水平偏低(男性VS女性(%):Cp G2:65.53±7.31 VS 60.26±10.46,adjusted P=0.046);(3)IFN-γ基因:符号秩和检验分析发现,女性IFN-γ启动子Cp G1位点甲基化水平偏低(男性VS女性(%):Cp G1:37.58±1.31 VS 36.52±1.64,adjusted P=0.020)。3、男性中,吸烟、饮酒与炎症因子基因DNA甲基化关联分析:(1)IL6基因:男性中,吸烟者的IL6启动子Cp G2-3甲基化水平降低(不吸烟者VS吸烟者(%):Cp G2:64.28±6.36 VS 60.41±7.74,adjusted P=0.023;Cp G3:57.78±7.87 VS 53.70±8.62,adjusted P=0.038);饮酒者的IL6启动子Cp G2-3甲基化水平降低(不饮酒者VS饮酒者(%):Cp G2:64.70±7.03 VS 60.89±7.32,adjusted P=0.038;Cp G3:60.48±7.58 VS 53.23±7.99,adjusted P=4.24×10-4);(2)TLR2和IFN-γ基因:未发现差异化位点。4、相关性分析:(1)TLR2基因:TLR2启动子Cp G6位点甲基化水平与血压成负相关(Cp G6 and SBP:r=-0.329,adjusted P=3.95×10-5;Cp G6 and DBP:r=-0.304,adjusted P=1.80×10-4);(2)IL6基因:IL6启动子Cp G2-3位点甲基化水平与血压成负相关(Cp G2and SBP:r=-0.274,adjusted P=0.009;Cp G2 and DBP:r=-0.183,adjusted P=0.011;Cp G3 and SBP:r=-0.321,adjusted P=5.60×10-6;Cp G3 and DBP:r=-0.274,adjusted P=1.17×10-4);(3)IFN-γ基因:IFN-γ启动子Cp G2位点甲基化水平与血压成负相关(Cp G2 and SBP:rs=-0.546,adjusted P=2.60×10-16;Cp G2 and DBP:rs=-0.539,adjusted P=7.60×10-16)。5、受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,简称ROC曲线)分析:(1)TLR2基因:分析发现TLR2启动子Cp G1位点和Cp G6具有诊断价值(Cp G1:AUC(area under curve)=0.612,P=0.007;Cp G6:AUC(area under curve)=0.834,P=1.31×10-15);(2)IL6基因:分析发现IL6启动子Cp G2-3位点具有诊断学价值(Cp G2:AUC(area under curve)=0.638,P=0.001;Cp G3:AUC(area under curve)=0.704,P=8.12×10-7);(3)IFN-γ基因:分析发现IFN-γ启动子Cp G2位点具有诊断学价值(Cp G2:AUC(area under curve)=0.834,P=1.40×10-15)。结论:1、TLR2启动子Cp G6位点,IL6启动子Cp G3位点和IFN-γ启动子Cp G2位点的低甲基化是原发性高血压的危险因素。2、女性TLR2启动子Cp G6位点甲基化水平偏高,女性IL6启动子Cp G2位点和IFN-γ启动子Cp G1位点甲基化水平偏低。男性和女性基因甲基化水平存在差异。男性中,吸烟者和饮酒者的IL6启动子Cp G2-3甲基化水平降低,吸烟和饮酒作为EH的危险因素可能通过影响基因Cp G位点甲基化水平影响原发性高血压的发生发展。3、相关性分析发现TLR2启动子Cp G6位点、IL6启动子Cp G2-3位点甲基化水平与血压成负相关,IFN-γ启动子Cp G2位点甲基化水平与血压成负相关。4、TLR2启动子Cp G1和Cp G6位点,IL6启动子Cp G2-3位点和IFN-γ启动子Cp G2位点具有诊断价值。