陈皮总黄酮的提取工艺优化及其抗过敏活性研究

陈皮,来源于芸香科植物橘(Citrus reticulate Blanco)及其栽培变种的成熟果皮,是我国一种药食同源的传统中草药,具有行气健脾、和胃止呕和燥湿化痰等功效。陈皮中含有黄酮类化合物、生物碱、挥发油、多糖和多种人体必需的微量元素等化学成分,其中黄酮类化合物具有抗氧化,抗炎、抗过敏和抗肿瘤等作用。本实验对陈皮总黄酮的提取工艺进行了优化,并对其抗过敏活性进行了初步研究。具体内容如下:1.陈皮总黄酮的提取工艺优化。采用回流法提取,HPLC进行检测,考察了提取溶剂的种类、浓度、用量和提取次数对陈皮总黄酮提取效果的影响,最优单因素分别是乙醇、60%、10倍量和3次,在此基础上进行正交试验确定了陈皮总黄酮的最佳提取工艺条件:8倍量的60%乙醇回流提取3次,每次时间分别为1.5、1.0、0.5 h。按照最优工艺条件得到的陈皮总黄酮粗提物,采用聚酰胺树脂对其进行吸附富集,考察了洗脱剂的种类、浓度和用量,得到优化的条件:洗脱浓度选用60%乙醇,洗脱剂的用量是3 BV。最终得到陈皮总黄酮提取的最优工艺条件为:取陈皮药材,粉碎过筛,精密称取5.0g,用8倍量的60%乙醇回流提取3次,每次时间分别为1.5、1.0、0.5 h;取已处理好的聚酰胺树脂,湿法装柱,将提取液注入柱子内,充分吸附后,取1 BV的纯水和3 BV的60%乙醇进行洗脱,收集的洗脱液即为陈皮总黄酮提取液,减压浓缩后获得陈皮总黄酮。2.陈皮总黄酮的抗过敏活性的研究。本实验通过建立OVA诱导BALB/C小鼠过敏模型的方法对陈皮总黄酮的抗过敏活性进行评价。建立动物模型的方法:致敏阶段采用OVA腹腔注射和皮下注射相结合的方式,激发阶段选择滴鼻激发,收集小鼠血清和肺泡灌洗液,制备肺组织切片,采用ELISA方法测定血清中Ig E和肺泡灌洗液中细胞因子IL-4、IL-13的含量,对肺组织切片进行H&E染色处理,观察其肺组织的炎性浸润情况。结果表明不同浓度的陈皮总黄酮提取物(10mg·kg-1、30 mg·kg-1和50 mg·kg-1)均能够明显减低小鼠血清中的Ig E和IL-4、IL-13的含量。同时从肺组织切片H&E染色处理结果可以发现,肺组织的炎性浸润情况得到了明显抑制。由此可知,陈皮中的总黄酮具有一定的抗过敏作用。