龙眼肉多糖硫酸酯化修饰及修饰前后体外抗肿瘤活性初步研究

目的:从龙眼肉中提取、纯化得到龙眼肉多糖,对其进行硫酸酯化结构修饰,并测定修饰前、后龙眼肉多糖的体外抗肿瘤活性。 方法:通过热水浸提法提取龙眼肉多糖,Sevag-木瓜蛋白酶法除龙眼肉多糖蛋白,H2O2法除龙眼肉多糖色素,苯酚-硫酸法测龙眼肉多糖的多糖含量,DEAE-纤维素柱层析纯化龙眼肉多糖,龙眼肉多糖A的纯度用醋酸薄膜纤维电泳和比旋光度法检测,采用浓硫酸法对龙眼肉多糖A进行硫酸酯化结构修饰,L9（3～4）正交设计对浓硫酸法的反应温度、反应时间及正丁醇与浓硫酸的反应试剂等条件进行优选,硫酸钡-比浊法测定其硫酸基含量,DEAE-纤维素柱层析纯化硫酸酯化龙眼肉多糖（LYRP4-1）,通过凝胶色谱法测定龙眼肉多糖A和LYRP4-1的分子量,MTT法体外测定龙眼肉多糖A和LYRP4-1对鼻咽癌HONE1细胞的抑制作用,苏木素-伊红染色和流式细胞仪观察鼻咽癌HONE1细胞凋亡情况。 结果:热水浸提法的龙眼肉多糖得率为6.30%,龙眼肉总糖含量为58.72%。龙眼肉多糖清除蛋白率为52.30%。DEAE-纤维素柱层析纯化流分龙眼肉多糖A得率为64.13%、龙眼肉多糖B得率为4.85%和龙眼肉多糖C得率为15.43%。醋酸薄膜纤维电泳和比旋光度法检测龙眼肉多糖A为均一多糖。硫酸酯化反应经L9（3～4）正交设计得到当反应时间为3h,反应温度为10℃,反应酯化试剂比为3:1时,浓硫酸酯化反应可以得到较高的取代度,取代度为2.03。LYRP4的pH值为4.63,显示为弱酸性。LYRP4-1在浓度5-80μg·ml-1范围内对鼻咽癌HONE1的抑制率与浓度呈现依赖关系,当浓度达到80μg·ml-1时最大抑制率为31.07%,龙眼肉多糖A在浓度5-80μg·ml-1范围内对鼻咽癌HONE1的抑制率随剂量的升高而逐步升高,当浓度为80μg·ml-1时最大抑制率为16.32%。HE染色显示随LYRP4-1浓度的升高细胞出现较明显的凋亡现象。流式图显示LYRP4-1的最高凋亡率为31.98%,龙眼肉多糖A的最高凋亡率为11.63%。 结论:经浓硫酸法可得到硫酸酯化多糖LYRP4;LYRP4-1对鼻咽癌HONE1的抑制率有低敏作用,但高于龙眼肉多糖A; LPRP4-1体外对鼻咽癌细胞HONE1有一定的细胞凋亡作用。