动物组织中11种喹诺酮类药物多残留的HPLC法研究

喹诺酮类抗菌药物(quinolones．QNs)广泛应用于兽医临床和水产养殖，为避免该类药物滥用和超量使用而导致致病菌产生耐药性及危害动物性食品的安全，农业部规定了其在动物源性食品中的最高残留限量(MRL)。目前我国农业部已经批准用于兽医临床的药物有诺氟沙星(norfloxacin．NOR)、氧氟沙星(ofloxacin，OFL)、环丙沙星(ciprofloxacin，CIPRO)、培氟沙星(pefloxacin，PEF)、洛美沙星(lomefloxacin，LOME)、达氟沙星(danofloxacin，DANO)、沙拉沙星(sarafloxacin，SARA)、恩诺沙星(enrofloxacin，ENRO)、二氟沙星(difloxacin，DIF)、噁喹酸(oxolinic acid，OXA)、氟甲喹(flumequine，FLU)等11种QNs，本研究旨在建立牛肉、猪肉、猪肝和猪肾中该11种QNs的多残留检测的高效液相色谱法(HPLC)，为制定动物源性食品中此类药物残留检测的国家标准奠定基础。 样品前处理：精密称取样品，先后用10％三氯乙酸／乙腈为90：10和80：20(V／V)比例提取两次，合并提取液并稀释至乙腈的含量低于10％；反相固相萃取柱(SPE)净化：分别用3ml甲醇活化和3ml蒸馏水平衡，上样，3ml10％甲醇淋洗，3ml甲醇洗脱。洗脱液用氮气或空气流吹干，流动相溶解，HPLC分析测定。 HPLC分析条件：Hypersil BDS-C18色谱柱；流动相为0.05 mol／L柠檬酸／0.1mol／L乙酸胺缓冲液(三乙胺调pH4.3-4.5)—乙腈，线性梯度洗脱：8％～24％乙腈(0～21min)，24％～40％乙腈(21～27.0min)，8％乙腈(27.01min)；流速为2ml／min，柱温为50℃，进样量为40μl，样品分析时间为27min，进样延迟时间为3min；荧光法检测器程序变换的激发波长／发射波长为：噁喹酸、氟甲喹为312nm／366nm，其它9种QNs为278nm／465nm。 在牛肉、猪肉、猪肝和猪肾中11种QNs残留检测方法的验证结果如下： 牛肉中，在1／2MRL、MRL、2MRL三个浓度水平中的回收率在50.47％～101.03％之间，批内变异系数≤8.54％，批间变异系数≤11.30％，各种喹诺酮类药物的总平均回收率(％)和总批间变异系数(％)分别为：诺氟沙星58.24，9.94；氧氟沙星83.33，6.19；环丙沙星73.85，7.23；培氟沙星84.63，4.41；洛美沙星82.55，4.53；达氟沙星87.50，3.98；恩诺沙星91.23，5.20；沙拉沙星85.15，3.57；二氟沙星84.56，4.59；噁喹酸80.15，5.16；氟甲喹82.84，4.20。 猪肉中，在1／2MRL、MRL、2MRL三个浓度水平中的回收率在51.96％～92.70％之间，批内变异系数≤9.69％，批间变异系数≤13.46％，各种喹诺酮类药物的总平均回收率(％)和总批间变异系数(％)分别为：诺氟沙星68.76，11.05；氧氟沙星89.46，5.75；环丙沙星75.14，7.08：培氟沙星84.95，5.14；洛美沙星85.07，4.11；达氟沙星81.90，4.92；恩诺沙星81.35，5.99；沙拉沙星73.58，7.01；二氟沙星77.65，8.57；噁喹酸71.50，6.76；氟甲喹75.82，3.59。 猪肝中，在1／2MRL、MRL、2MRL三个浓度水平中的回收率在61.65％～98.49％之间，批内变异系数≤8.47％，批间变异系数≤10.21％，各种喹诺酮类药物的总平均回收率(％)和总批间变异系数(％)分别为：诺氟沙星66.00，8.59；氧氟沙星89.45，4.82；环丙沙星68.58，6.33；培氟沙星76.63，5.03；洛美沙星86.32，6.98；达氟沙星81.41，8.39；恩诺沙星82.16，7.26；沙拉沙星76.97，7.35；二氟沙星77.75，5.02；噁喹酸72.34，6.62：氟甲喹74.14，5.30。 猪肾中，在1／2MRL、MRL、2MRL三个浓度水平中的回收率在55.50％～98.34％之间，批内变异系数，除氟甲喹最大值是12.09％，其余都≤8.02％，批间变异系数≤12.16％，各种喹诺酮类药物的总平均回收率(％)和总批间变异系数(％)分别为：诺氟沙星67.11，7.13；氧氟沙星85.95，8.62；环丙沙星73.07，11.18；培氟沙星84.95，8.98；洛美沙星84.60，11.31；达氟沙星88.12，9.09；恩诺沙星85.68，8.84；沙拉沙星83.37，10.67；二氟沙星81.68，9.72；噁喹酸72.43，8.54；氟甲喹82.8，7.45。 最低检测限和定量限：在牛肉中为0.2～6.5μg／kg和0.7～21.6μg／kg，在猪肉中为0.2～6.0μg／kg和0.8～20.0μg／kg，在猪肝中为0.3～10.0μg／kg和1.2～33.3μg／kg，在猪肾0.3～8.2μg／kg和0.9～27.2μg／kg之间。 本研究所建立的动物组织中11种喹诺酮类药物多残留的HPLC法，在国内外尚属首例，其检测灵敏度高，回收率和变异系数均符合残留检测方法要求，适用于在国内兽药残留检测部门、食品卫生检验部门、内外贸易口岸等部门使用。