基于代谢组学的慢性乙型肝炎湿热中阻证物质基础的研究

目的：运用代谢组学方法,对比分析健康正常人及慢性乙型肝炎湿热中阻证患者以及经肝毒清颗粒治疗后的患者血清代谢产物谱,从分子水平探讨慢性乙型肝炎湿热中阻证发生发展的物质基础及肝毒清颗粒治疗慢性乙型肝炎湿热中阻证的作用机制,为慢性乙型肝炎湿热中阻证患者的临床诊断和治疗提供现代科学依据。方法：选取门诊体检结果为无乙肝感染史的健康志愿者20例作对照,不做任何治疗,编为Ctrl；选取临床符合慢性乙型肝炎诊断标准并经两名接受过严格培训的副高以上中医师辨证为湿热中阻证患者20例；肝毒清颗粒治疗前20例为观察组,编为TMl；15例经肝毒清颗粒治疗后作为治疗组,编为TM2。记录各组标本肝功、HBV-DNA、B超等实验室检查指标数据。治疗组使用肝毒清颗粒治疗(口服,一天3次,一次10克,连续治疗3周),每1周检测1次肝功能,并做记录。收集对照组、观察组及治疗组血浆标本各100μL。采用液相色谱质谱联用技术——液质联用技术进行血清代谢产物谱分析；采用偏最小二乘法判别分析(partial least square discrimination analysis, PLS—DA)进行数据处理以获得差异血浆代谢产物。结果：(1)在PLS-DA分析中,观察组、治疗组与对照组有明显的代谢图谱分离；治疗组较观察组有明显向对照组靠拢的趋势。(2)与对照组相比较,观察组血浆中磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine, PE),植物鞘氨醇(Phytosphingosine)、亚麻酸(9,10-DiHODE),胆红素异构体(4E,15Z-Bilirubin Ixa),对称二甲基精氨酸(Symmetric dimethylar-ginine),11-羟基-生育三烯酚(11'-Carb oxy-alp hatocotrieno1),溶血磷脂酸(Lyso-phosphatidicacid,Lyso-PA),溶血磷脂酰胆碱(18：3)(卵磷脂)(Lyso-phosphatidylcholine, Lyso-PC),胆酸葡萄糖醛酸(Cholic acid glucuronide),甘氨鹅脱氧胆酸(Glyco chenodeoxycholic acid3-glucuronide),牛磺酸(Taurochenodesoxycholic acid)11种化合物峰值升高较明显；磷脂酰胆碱(22：6)(phosphatidylcholine,PC)和溶血磷脂酰胆碱(18：2)(卵磷脂)(Lyso-phosphatidylcholine, Lyso-PC)2种化合物峰值有所降低。(3)与观察组相比,治疗组血浆中植物鞘氨醇(Phytosphingosine),磷脂酰胆碱(18：4)(phosphatidylcholine, PC),甘氨鹅脱氧胆酸(Glycochenodeoxycholic acid3-glucuronide)3(?)中化合物的峰值较治疗前降低明显。结论：①代谢组学分析结果得知：慢性乙型肝炎湿热中阻证患者与健康正常人之间存在代谢产物主成分差异。②肝毒清颗粒治疗慢性乙型肝炎湿热中阻证患者效果显著。③肝毒清颗粒治疗慢性乙型肝炎湿热中阻证取得较好的疗效,其机制可能与其调节脂类和胆汁酸的代谢有关。④胆红素、对二甲基精氨酸、甘氨鹅脱氧胆酸、胆酸葡萄糖醛酸、牛磺酸、溶血磷脂酸(LPA(18：2))可能是慢性乙型肝炎湿热中阻证的潜在标志物。