植酸酶体外消化评定技术的研究

随着生物技术和发酵工艺的发展，饲用酶制剂产品种类和数量也日益增多。因此，建立科学可靠的酶制剂评定方法非常重要。目前，饲用酶制剂的评定方法主要有测定酶活和动物试验2种，但二者均存在不同程度的局限性，故十分有必要建立一种简单、快捷和经济的方法，对众多饲用酶制剂产品进行评定，从而选择更为经济有效的酶制剂产品。本研究通过对肉仔鸡消化参数发育规律和体外消化模拟装置参数的研究，建立一套肉仔鸡体外消化模拟方法。并对该方法评定不同剂量与产品植酸酶作用效果的可行性和可靠性进行研究与检验。 1．肉仔鸡几种消化参数的发育规律 通过对不同日龄肉仔鸡几种消化参数的实际测定，了解肉仔鸡消化参数在生长期内发育规律及其与肉仔鸡生长间的关系，为肉仔鸡体外消化模拟装置的建立提供消化参数。选择174只1日龄AA肉仔鸡公雏，随机分成3组，采食玉米-豆粕日粮。在自由采食和饮水的条件下，分别于10、14、17、21、28、35、42和49日龄测定肉仔鸡的日采食量和体重。各日龄上午9：00每组分别取10、9、8、7、6、6、6和6只试验鸡，断颈宰杀。取出嗉囊、腺胃与肌胃、十二指肠、空肠和回肠食糜，分别测定pH、食糜水分含量和消化酶活。同时，测量小肠长度。结果表明，嗉囊、腺胃和肌胃内食糜pH随日龄逐渐增加，而小肠内食糜pH随日龄变化不大。随日龄增加，肉仔鸡不同消化道部位食糜含水量无明显变化。小肠长度随日龄增幅较大，小肠前期发育不足可能是影响肉仔鸡生长的一个因素。肉仔鸡胃蛋白酶随日龄增加而逐渐增加，并于28日龄达到峰值，生长前期胃蛋白酶分泌不足也可能是影响肉仔鸡生长的一个因素。与十二指肠和回肠相比，肉仔鸡空肠中各种消化酶普遍保持相对较高的水平。肉仔鸡空肠内淀粉酶和胰蛋白酶分别于35日龄和21日龄左右达到峰值，生长前期淀粉酶和胰蛋白酶分泌不足，可能对肉仔鸡生长产生影响。糜蛋白酶和脂肪酶均于14日龄左右达到峰值。本试验研究结果表明，肉仔鸡生长前期未表现出糜蛋白酶和脂肪酶分泌不足的现象。酶活表示方法对肉仔鸡酶活发育规律有一定影响。以U/mg蛋白表示肉仔鸡空肠内各种酶活水平时，淀粉酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶达到峰值的时间普遍推后，但以U/g食糜鲜重、U/g食糜干物质和U/mg酸不溶灰分表示时，各种酶活发育规律比较一致。 2．肉仔鸡体外消化模拟装置的建立及相关参数的研究 根据肉仔鸡消化参数发育规律的研究结果和有关文献资料，确定肉仔鸡体外消化模拟装置中嗉囊、胃和小肠段pH、食糜含水量、消化酶水平和食糜停留时 间等主要消化参数。用猪胃蛋白酶、胰酶、胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶等商 品消化酶代替肉仔鸡消化酶，模拟饲料养分在肉仔鸡犊囊、胃和小肠的消化过程。 采用连续透析法模拟己消化养分的吸收过程。在体外条件下，分别研究4种透析 液流速、添加与不添加胆汁提取物、2种透析袋截留分子量、二种饲料样品粉碎 粒度和3种样品重对肉仔鸡前期玉米．豆粕日粮粗蛋白和淀粉体外消化率的影响， 确定该装置相应的适宜参数。结果表明，粗蛋白和淀粉消化率随透析液流速增加 而增加，当流速达到二．Sml／min时，粗蛋白和淀粉消化率达到最大。添加胆汁提 取物溶液，肉仔鸡日粮粗蛋白（P＜0．05）和淀粉（P＜l．们）的体外消化率显著提 高。采用截留分子量为12000—14000 Da的透析袋时，粗蛋白和淀粉体外消化率 均显著高于截留分子量为二200一2000D＜的透析袋（P＜o．0豆）。各日龄肉仔鸡空肠 食糜的粒度经过胃和十二指肠后均有明显降低，60目过筛率平均达到 50％以上。 饲料样品粉碎粒度由40目降至60目，粗蛋白和淀粉消化率均显著提高（P＜0．05人 当饲料样品为1．sg时，粗蛋臼和淀粉体外消化率均显著低于0．sg和b（P＜0．of人 当测定样品重为0．sg和ig时，粗蛋白和淀粉消化率均无显著差异（P＞o．05人因 此，分别以二．sml／min、12000～14000Da、60目和k 作为本试验肉仔鸡体夕消 化模拟装置的最适流速、透析袋截留分子量、饲料样品粉碎粒度和重量比较适宜。 该装置粗蛋白和淀粉体外消化率的变异系数均低于5％。 3．不同剂量植酸酶对肉仔鸡玉米．豆粕日粮磷利用影响的体内外研究 通过不同剂量植酸酶对肉仔鸡生产性能和磷利用影响的体内外研究，检验该装 置评定不同剂量植酸酶作用效果的可行性和可靠性。选择240只1日龄AA肉仔 鸡公雏，随机分为6组，每组4个重复，每个重复10只。各组试验鸡分别饲喂正 常磷水平玉米－豆粕日粮（0．46％非植酸磷，对照组）、无磷酸氢钙日粮（0．25％非 植酸磷，负对照）、负对照加 ZSOU／kg、S00U／kg、1000U／kg和 1500U／kg植酸酶A 等6种日粮。ZI日龄记录各组试验鸡体重、采食量和死亡率。断颈宰杀，取回肠 －食糜测定日粮磷回肠表观消化率。取腔骨测定肚骨灰分和磷沉积量及腔骨灰分中 磷的含量。肉仔鸡的生产性能、磷回肠表观消化率、腔骨灰分和磷沉积量及腔骨 灰分中磷的含量因添加植酸酶而提高，并与添加剂量呈二次曲线关系。但加酶组 各测定指标仍低于正常磷水平日粮。