ISSR在食用菌遗传多样性研究中的应用

本研究以黑木耳(Auicularia auricula)、白灵菇(Pleurotus nebrodensis)、灰树花(Grifolafrondosa)、金针菇(Flammulina velutipes)、滑菇(Pholiota nameko)、茶树菇(Agrocybe cylindracea)、杏鲍菇(Pleurotus eryngii)和鸡腿菇(Coprinus comatus)等8种食用菌105个菌株为材料，针对菌丝体中多糖等物质丰富的特点，改进DNA提取方法，获得高质量DNA；设计引物，优化反应体系利扩增条件，进行ISSR遗传多样性分析，形成了适合多种食用菌菌株遗传鉴别鉴定和遗传分析的技术和方法。 研究表明，我国食用菌栽培菌株遗传多样性丰富，多数种内不同菌株之间遗传距离在0.4以上。21个黑木耳(A．auricula)菌株，10个引物扩增出185个位点，多态性位点比例(P)为97.84％，平均每个位点的观察等位基因数(Na)为1.9784，平均每个位点的有效等位基因数(Ne)为1.2396，Nei's基因多样性(H)平均为0.2732，Shannon's信息指数(I)为0.4278，省际间菌株基因流(Nm)值为2.7528；20株白灵菇(P．nebrodensis)，11个引物共扩增出70个位点，P为75.71％，Na为1.7571，Ne为1.5310，H为0.2967，I为0.4324：13株灰树花(G．frondosa)，12个引物共扩增出178个位点，P为84.83％，Na为1.8483，Ne为1.3245，H为0.1988，I为0.3168；12个ISSR引物将13个金针菇(F．velutipes)菌株扩增出124个位点，P为91.94％，Na为1.9194，Ne为1.4819，H平均为0.2844，I为0.4313；16个引物将12株滑菇(P．nameko)扩增出146个位点，P为86.99％，Na为1.8699，Ne为1.3880，H为0.2395，I为0.3733；13个引物将10株茶树菇(A．cylindracea)扩增出194个位点，P为87.63％，Na为1.8763，Ne为1.4455，H为0.2669，I为0.4095；9株杏鲍菇(P．eryngii)，13个引物扩增出250个位点，P为90.80％，Na为1.9080，Ne为1.3722，H为0.2388，I为0.3803；7株鸡腿菇(C．comatus)，14个引物扩增出141个位点，P为70.21％，Na为1.6474，Ne为1.2931，H为0.1803，I为0.2828。基于菌株间Nei'遗传距离的UPGMA聚类分析表明，我国栽培食用菌菌株的分布与地理区域无关，表明我国食用菌菌株适应栽培地域性强，生产菌株在全国范围内引种频繁。 以白灵菇和杏鲍菇为材料，进行酯酶同工酶分析，将分析结果与ISSR分析结果相比较，结果表明两种方法对菌株的分析结果大致相同，都是鉴别菌株的良好方法，但对遗传关系的分析结果有差异。 对不同白灵菇菌株的ISSR扩增位点进行连接、转化、克隆、测序，获得了24个位点的序列，对序列初步分析结果表明：(1)5’锚定引物对扩增的特异性相对较弱，相似的引物间存在非特异扩增位点；(2)同一个引物对不同菌株的扩增得到的相同位点，虽然在分子量大小上没有差异，但位点内部存在着单个核苷酸位点的差异；(3)ISSR扩增位点序列在GenBank中Blast比对结果发现，与已登录的功能基因序列无同源性；(4)ISSR扩增位点序列内存在着大量的串联重复序列，说明这些ISSR扩增区域正是微卫星的活动频繁区域。