五味子、南五味子基源植物的比较研究

中药五味子、南五味子分别为五味子科植物五味子（Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.）和华中五味子（Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils）的干燥果实，具有收敛固涩、益气生津、补肾宁心之功效，临床应用十分广泛。但是，不同产地的华中五味子果实在降酶作用、木脂素类型和含量方面存在显著差异，造成南五味子药材质量极不稳定，直接影响到南五味子的临床疗效；华中五味子种内变异规律不明，对于五味子和华中五味子种内居群的遗传多样性和种质资源的鉴定与评价未曾作过深入研究；五味子和南五味子药材的质量标准缺乏专属性。本文从资源调查入手，采用植物分类学、植物解剖学、中草药成分分析和 DNA 分子标记技术，比较研究五味子和华中五味子的变异规律；寻找优良的种质资源；建立更加完善的五味子、南五味子定性与定量质控方法，为五味子、南五味子药材的生产、收购、鉴定分析提供科学依据，确保临床用药的安全、有效。 1.通过对五味子、南五味子主产区的资源调查和植物分类学研究，发现华中五味子在陕西安康、汉中、西安、渭南、太白山、眉县、湖南衡山、石门、湖北神农架、四川东南部、河南伏牛山山区、山西阳城、沁水、陵川、甘肃天水分布广泛，山西垣曲、翼城也有分布。在华中五味子分布区还有多种同属植物如绿叶五味子（S. viridis A. C. Smith）、红花五味子（Schisandra rubriflora (Planch.) Rehd. Et Wils.）、翼梗五味子（S. henryi Clarke）、铁箍散（S. propinqua (Wall.) Baill. var. sinensis Oliva）等分布，南五味子药材的来源混杂不清。 五味子主要分布于黑龙江、吉林和辽宁的长白山区和小兴安岭东部山地及其边缘丘陵地带；河北、山西、山东也有分布。在五味子分布区，同属植物中仅有五味子一种植物分布，因此五味子药材来源单一。 2.通过扫描电镜对种皮微形态进行观察，可以将五味子、不同产地的华中五味子、红花五味子、绿叶五味子和翼梗五味子分为4种类型。五味子种皮表面平滑有覆盖层属Ⅰ型，主产地南五味子种皮表面较平滑，有细皱或微有凸起且在一些区域有次级纹饰，属Ⅱ型。种皮表面是否有瘤状凸起、是否有次级纹饰是重要的鉴别点，据此可以将绿叶五味子和翼梗五味子与华中五味子和红花五味子相区别。 在光学显微镜下观察了不同产地华中五味子叶表皮结构和导管分子特征，应用多元回归方法对不同产地华中五味子叶表皮结构及导管分子特征的变异与环境因子 的相关性进行了探讨，发现随着不同产地环境因子的变化，华中五味子下表皮的气孔密度、气孔器指数、气孔器长、宽、气孔极区角质加厚、分泌细胞密度存在着明显的差异。随着年平均气温的升高，华中五味子下表皮的气孔器面积、气孔器长度 呈减少的趋势；随着年降水量的增加，气孔器宽度减小；随着相对湿度的增加，分泌细胞密度增加。年降水量同导管分子长度与直径的比值（L/D）有显著的相关性。随着年降水量的增加，导管长度与直径的比值（L/D）有增加的趋势，表明水分对导管分子长度和直径有着一个协同影响的作用。 3. 对五味子、华中五味子的木脂素成分进行研究，从五味子种子中分离得到5个木脂素成分：五味子丙素（schisandrin C）、五味子乙素（schisandrin B）、五味子甲素（deoxyschizandrin）、五味子酯甲（schisantherin）、五味子醇乙（gomisin A）；从华中五味子果实中分离得到1个木脂素成分d-表加巴辛（d-epigalbacin），同时分离得到1个三萜类成分安五酸（anwuweizic acid）。 4.采用TLC方法对不同产地华中五味子、五味子及其近缘种果实中木脂素成进行薄层色谱鉴别研究。结果表明，华中五味子果实主要含有五味子酯甲、五味子甲素和安五脂素，展开剂Ⅰ.甲苯-醋酸乙酯（92:8）对其分离效果好，因此，华中五味子果实薄层鉴别应选用展开剂Ⅰ。五味子果实主要含有五味子醇甲、五味子醇乙和五味子乙素，不含安五脂素，展开剂Ⅱ. 甲苯-醋酸乙酯（70:30）对其分离效果好，因此，五味子果实薄层鉴别应选用展开剂Ⅱ。 根据样品中木脂素成分五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素及安五脂素在紫外灯（254nm）下暗斑的强弱和显色特征，不仅可以用于鉴别不同产地的华中五味子果实和五味子、绿叶五味子、红花五味子及翼梗五味子果实，而且对其有效成分含量可以作出初步的判别。 5. 通过对不同产地五味子、华中五味子果实中10种木脂素的HPLC含量测定发现，五味子果实含有的木脂素成分以五味子醇甲、 五味子醇乙、五味子乙素为主，其中五味子醇甲不仅是保肝降酶的有效成分，而且其含量可以反应6种木脂素成分含量的变化趋势，同时华中五味子果实不含或仅含微量的五味子醇甲，因此，五味子醇甲作为五味子定量检测的对照品较为合理，其含量应不低于0.27%；质量较优的华中五味子果实主要含有五味子酯甲、五味子甲素和安五脂素，其中五味子酯甲为保肝的有效成分，安五脂素含量可以反应出10种木脂素成分含量的变化趋势，而且五味子酯甲和安五脂素在五味子果实中含量很低，因此，建议五味子酯甲和安五脂 素为南五味子定量检测的对照品，五味子酯甲