枯否氏细胞NF-κB活性在肝损伤中的作用机制

目的：了解重组TNFα刺激下的培养肝脏枯否氏细胞NF-κB活性的时程性变化及不同剂量重组TNFα对枯否氏细胞NF-κB活性的作用规律，观察地塞米松对枯否氏细胞NF-κB活性及其调控的细胞因子TNFα的影响，明确NF-κB活性在肝损伤中的作用。 方法：原位灌注消化Spraqae-Dawley大鼠肝脏，应用不同离心力获取肝脏非实质细胞，不连续密度梯度离心、选择性贴壁分离肝脏枯否氏细胞，培养、-80℃冻存。取0.5-1.0×10～7／ml浓度进行实验分组，包括对照组6孔，重组TNFα终浓度为10ng／ml刺激，按时点0，0.5小时，1小时，2小时，4小时，6小时，8小时共分7亚组，每组各6孔，不同浓度重组TNFα刺激2小时按0ng／ml，5ng／ml，10 ng／ml，20ng／ml，50 ng／ml，100ng／ml共6亚组，每组各6孔，10 ng／ml亚组预先加入2mg／L地塞米松保护共6孔，重组TNFα 10ng／ml刺激2小时组取培养基行TNFα ELISA检测，所有各组收集细胞核抽提后行NF-κB ELISA检测。 结果：原位灌注消化大鼠肝脏后初步离心获得非实质细胞约233.0±94.53×10～6细胞／g鼠肝，密度梯度离心获得非实质细胞40.03±3.56×10～6细胞／g鼠肝，选择性贴壁获得Kupffer细胞数为30.83±3.24×10～6细胞／g鼠肝，细胞纯度为95.5％，存活率为94.85％，大鼠重组TNFα 10ng／ml刺激后，枯否氏细胞NF-κB活性逐步升高，至2小时时点达最高后渐下降，到8 枯否氏细胞NF一‘B活性在肝损伤中的作用机制中文提要 小时点与对照组比较P>0.05，其余时点与对照组比较P<0.001，NF一KB 活性随重组1刊FQ浓度升高而增大，各组与对照组比较P<0.001，地塞米 松保护组与10n留ml重组TNF。刺激组比较，TNF。浓度与礴一KB活性 均下降，统计有显著性差异(P<0.001)。 结论:重组TNFQ可刺激肝脏枯否氏细胞NF一B活性增高，具有浓度依 赖性的特点，NF一KB活性的时程性升高在2小时之前，表明其调控炎症 介质是个早期事件，地塞米松可抑制NF一KB活性并下调其调控的核心细 胞因子分泌。