制附子干预大鼠佐剂性关节炎作用研究

目的 类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)是一种慢性、对称性多关节炎为主要表现的自身免疫性疾病,病变呈持续、反复发作的过程,其主要病理变化为关节滑膜的慢性炎症,炎细胞浸润,滑膜血管新生和血管翳的形成,血管翳可向邻近软骨及骨组织侵蚀,导致骨质破坏,关节畸形和功能丧失。由于其病因及发病机制尚未完全清楚,至今仍无良好的治疗方法。目前临床上应用的非甾体类抗炎药,糖皮质激素等毒副作用大,且缺乏长期临床用药的安全性和耐受性,而针对某些细胞因子的生物制剂价格又较为昂贵,导致患者长期服用依从性差,不利于疾病控制,因此选择一种效价比好、低毒高效的药物显的尤为重要。近年来,祖国医学治疗RA的临床研究取得了一定的进展,疗效可靠,优势明显,尤其在减少西药毒副作用、降低复发率、提高疗效等方面作用肯定,显示了良好的前景。 RA属于中医“痹证”范畴,风寒湿邪侵袭,痰湿瘀阻经络是其主要病因机制,正气不足、肝肾亏虚是其发生发展的根本原因,制附子温经通络,是治疗类风湿疾病的重要药物之一,本实验以弗氏完全佐剂所诱导的佐剂性关节炎(adjuvant arthritis, AA)大鼠模型为基础,通过动态观察制附子用药2周、4周时对AA大鼠足肿胀率、血清NO、IL-1β水平以及滑膜血管新生及软骨破坏等病理过程中相关因子的影响,以期探讨该药治疗大鼠佐剂性关节炎的初步机制。 方法 [1]建立佐剂性关节炎大鼠模型。 [2]通过观察制附子用药2周、4周时对佐剂性关节炎大鼠足肿胀率、血清NO、 IL-1β、滑膜病理改变的影响,初步探讨制附子对佐剂性关节炎大鼠免疫炎症的干预作用。 [3]通过免疫组织化学染色的方法检测滑膜组织中VEGF、HIF-1α的表达,同时观察滑膜病理切片血管新生情况,探讨制附子对滑膜血管新生的影响。 [4]用免疫组织化学染色方法检测关节软骨细胞iNOS、MMP-3的表达,同时通过光镜下观察滑膜及软骨组织的病理改变,探讨制附子对大鼠佐剂性关节炎软骨破坏的影响。 结果 1.成功建立大鼠佐剂型关节炎模型。模型组大鼠出现关节红肿,尾巴结节,耳朵红色斑点及结节,足肿胀率明显增高(p<0.05),血清NO、IL-1β水平亦显著升高(p<0.05)。 2.制附子用药2周后可显著降低AA大鼠足肿胀率,与模型组比较呈显著性差异(p<0.05)；可有效降低血清NO、IL-1β水平(p<0.05),用药组大鼠滑膜病理分级与关节炎指数评分,与模型组相比有统计学意义(p<0.05)。 3.制附子用药组与同期模型组相比,4周组可明显降低大鼠滑膜组织中VEGF的表达(p<0.05),对滑膜组织中HIF-1α的表达无明显降低作用(p>0.05),2周组对VEGF、HIF-1α的表达无统计学意义(p>0.05)；滑膜病理及血管生成评分结果显示,模型组大鼠滑膜组织大量纤维增生,血管增生及新生血管形成,滑膜增生夹杂新生的血管,用药4W组明显抑制了AA大鼠滑膜血管增生,减少血管新生,用药2W组与同期模型组比较无显著改善。 4.制附子用药4周组可明显降低大鼠滑膜组织中iNOS、MMP-3的表达,与模型比较有显著差异(p<0.05),用药2周组对iNOS、MMP-3的表达亦有降低趋势,差异无显著性(p>0.05)；光镜下对滑膜和软骨进行病理指数分级显示,模型组模型组大鼠关节软骨破坏严重,软骨细胞固缩或者消失,出现软骨下骨侵蚀。用药4周组大鼠关节受到轻中度损伤,未见骨侵蚀,抑制了大鼠关节软骨破坏。用药2W组与同期模型组比较无显著改善。 结论 1.制附子用药2周时可通过抑制促炎因子表达,降低AA大鼠足肿胀率,调整细胞因子的网络失衡,干预免疫炎症。 2.制附子用药4周组可明显抑制部分促血管新生相关因子的表达,减少滑膜血管新生；同时可降低部分软骨破坏相关因子的表达,对佐剂性关节炎大鼠关节软骨破坏起到一定的抑制作用,从而改善了AA大鼠病情。 3.制附子辛散温通,散寒止痛,用药2周时可有效抗炎,缓解AA大鼠症状,减轻足肿胀率；继续用药4周时,通过其补肾阳、益骨生髓作用,抑制了AA大鼠滑膜血管新生,减轻软骨破坏,达到治疗RA的目的。 本实验结果提示制附子具有减缓类风湿关节炎免疫介导炎症反应,改善滑膜血管新生和软骨破坏的作用,为单味中药多靶点治疗类风湿关节炎提供了实验依据。