渐危药用植物秦艽产活性成分内生真菌的初步研究

从秦艽根、茎、叶中共分离出20种内生真菌。经初步筛选，得到5株可能产秦艽主要成分龙胆苦苷的菌株QJ2、QJ8、QJ12、QJ16和QJ18。进一步筛选发现，其中QJ18产龙胆苦苷能力较强，故以此作为供试菌株，对其做了以下的研究。 对龙胆苦苷的薄层层析检测方法进行了筛选，发现用乙酸乙酯：甲醇：水（20：2：1）作为展开剂，用碘熏蒸显色是较为理想的检测条件。 对QJ18菌株产生的龙胆苦苷的提取方法进行了选择和优化，制备薄层是提纯的较理想方法。 薄层扫描等检测结果显示，QJ18提取物、龙胆苦苷标准品的紫外-可见光吸收曲线相似，都在254nm和270nm有吸收峰；高效液相结果表明QJ18提取物有一个峰的保留时间和龙胆苦苷标准品的基本相同。QJ18提取物红外谱图存在与龙胆苦苷结构中官能团相一致的特征峰。液质联用结果显示QJ18提取物液相色谱图中主峰和龙胆苦苷标准品保留时间一致，QJ18提取物液相色谱图中主峰的质谱图与标准品质谱图一致。这些结果都表明内生真菌QJ18能够产生和其宿主相同的龙胆苦苷成分。 利于龙胆苦苷产生的基本培养基以马铃薯葡萄糖液体培养基为最佳。利用液体培养基对其中的碳、氮源进行了筛选，结果显示，对于QJ18菌丝生长和龙胆苦苷的产生来说，蔗糖和尿素是较理想的碳源和氮源。 通过正交实验优化了QJ18的发酵条件，得出适宜菌丝体生长的培养条件为：蔗糖30g·L-1，尿素2g·L-1，装量为105ml／300ml，PH7.0左右，培养温度28℃，震荡速度80次／min；有利于龙胆苦苷产生的培养条件是：蔗糖25g·L-1，尿素2.5g·L-1，装量为120ml／300ml，PH7.0左右，培养温度28℃，震荡速度为80次／min。 对内生真菌QJ18进行了初步的菌种鉴定，其在分类学上的地位为真菌门，藻菌纲，毛霉目，毛霉科，根霉属。