威灵仙多糖的分离纯化及其活性研究

本论文对威灵仙多糖进行分离纯化，得到了两种精制威灵仙多糖组分，并对其进行了研究。研究主要内容如下： 威灵仙粗多糖提取工艺的优化。威灵仙药材粉碎后，先用乙醇回流除去单糖、寡糖等小分子物质，然后采用正交实验设计考察了料液比、提取时间、提取温度和醇沉浓度对粗多糖提取率的影响，并结合实际综合考虑提取效率、多糖性质等，最终确定最佳提取工艺：提取温度80℃、料液比1：15、提取时间15h、乙醇浓度80％。 威灵仙多糖的分离纯化。威灵仙粗多糖经脱色、除蛋白后再经DEAE-SepharoseF．F分离，得到CCP-Ⅰ，CCP-Ⅱ，CCP-Ⅲ三个多糖组分。CCP-Ⅲ再经Superdex-200柱层析分离，得到威灵仙精制多糖CCP-Ⅲa、CCP-Ⅲb。 威灵仙精制多糖(CCP-Ⅲa、CCP-Ⅲb)的性质及其结构的初步研究。通过苯酚-硫酸法、间羟联苯法、考马斯亮兰法、凝胶过滤法、琼脂糖凝胶电泳、紫外扫描等方法对CCP-Ⅲa、CCP-Ⅲb进行分析测定。采用红外、紫外、气相色谱、高碘酸氧化等手段对CCP-Ⅲa、CCP-Ⅲb的结构进行初步研究。结果如下：CCP-Ⅲa为均一组分，其总糖含量、糖醛酸含量、蛋白质含量分别为92．4％、27．6％、6．9％；CCP-Ⅲb也为均一组分，其总糖含量、糖醛酸含量、蛋白质含量分别为89．9％、39．5％、9．4％。它们的分子量分别为3．1×10～5Da、1．5×10～5Da。CCP-Ⅲa的单糖组成及摩尔比为：鼠李糖：阿拉伯糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖=4．7：1：5．6：26．4：3．9；CCP-Ⅲb的单糖组成及摩尔比为：鼠李糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖=1．5：1．0：25．8：16．3。它们没有典型的核酸和蛋白质等吸收峰；糖苷键主要为β-构型，且均含有1→3、1→6连接键型。 威灵仙多糖CCP-Ⅲ抗氧化活性研究。威灵仙多糖CCP-Ⅲ具有清除羟基自由基和超氧阴离子自由基的作用，可显著提高四氯化碳肝损伤小鼠血清和肝脏中SOD、GSH-PX活力，降低血清和肝脏中丙二醛(MDA)含量及肝脏指数。威灵仙多糖CCP-Ⅲ在体内外均具有显著的抗氧化作用，其抗氧化作用与清除氧自由基有关。 威灵仙多糖抗肿瘤活性研究。威灵仙多糖CCP、CCP-Ⅲ、CCP-Ⅲa、CCP-Ⅲb在体外对人宫颈癌HeLa细胞株、人乳腺癌细胞株(MCF-7)均无明显抑制作用，而在体内均能抑制小鼠S180瘤体的生长，显著提高小鼠的胸腺指数和肝脏指数，增强小鼠机体的免疫力。CCP-Ⅲ抑制率最高，当剂量为80mg／kg时，抑瘤率达到41．8％。