半枝莲为唇形科植物半枝莲(Scuteuaria barata D.Don)的干燥全草,其主要生理活性物质为黄酮类化合物。半枝莲产地广泛,不同产地的半枝莲的化学成分也存在差异,本研究通过测定半枝莲药材中总黄酮,9种黄酮类单体和8种微量元素,用于10批不同产地药材的比较及评价,为半枝莲的多组分质量控制提供实验依据。临床研究表明,半枝莲在治疗肝癌、肝炎等病上药效明确,但具体的抗肝癌物质基础和机制尚不明确,本研究采用人肝癌HepG-2细胞作为研究对象,采用MTT法、倒置显微镜观察、流式细胞仪等方法,比较半枝莲中黄酮类单体对HepG-2细胞体外增殖的影响,并初步对野黄芩苷诱导HepG-2细胞凋亡机制进行探讨。为半枝莲抗肝癌的临床应用及揭示其抗肝癌的物质基础提供理论依据。全文分为以下五个部分。1、分光光度法测定半枝莲总黄酮含量采用分光光度法,以芦丁为对照品,比较了 10个不同产地半枝莲总黄酮的含量。结果:浙江温州8.67%、河南南阳5.78%、江苏苏州5.72%、河北保定4.42%、福建古田4.21%、安徽亳州3.78%、湖北黄冈3.75%、山西太原3.32%、广东梅州1.78%、广西玉林1.12%。2、HPLC法同时测定半枝莲中9种黄酮类化合物含的量通过HPLC法比较了不同产地各黄酮类成分的含量。含量范围分别为:野黄芩苷:0.492%～0.713%、黄芩素:0.021%～0.045%、汉黄芩素:0.027%～0.087%、黄芩苷:0.006%～0.034%、槲皮素:0.015%～0.271%、野黄芩素:0.032%～0.087%、木犀草素:0.011%～0.236%、柚皮素:0.006%～0.023%、芹菜素:0.041%～0.141%。3、高温消解-ICP-OES测定半枝莲中的微量元素利用HN03+H202高温消解结合全谱直读电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-OES)分析测定不同产地半枝莲中微量元素锰(Mn)、镉(Cd)、铬(Cr)、铜(Cu)、铁(Fe)、镍(Ni)、铅(Pb)、锌(Zn)的含量。结果显示:铁元素含量最高,含量范围为868.38～5046.45 mg/Kg,其次为锰138.13～453.79 mg/Kg。10批不同产地半枝莲药材中8种金属元素含量有差异。4、半枝莲黄酮化合物抑制人肝癌HepG-2细胞增殖活性筛选采用MTT法,研究半枝莲中9个黄酮类的成分(野黄芩苷、黄芩苷、野黄芩素、槲皮素、木犀草素、柚皮素、芹菜素、黄芩素、汉黄芩素体外对人肝癌HepG-2细胞的增殖抑制作用,结果表明7种半枝莲黄酮类化合物对HepG-2细胞均有一定的抑制作用。药物作用细胞后,对细胞的增殖均有明显的抑制作用,并呈现剂量和时间依赖性,其抑制作用(以半枝莲药材的IC50计)野黄芩苷>槲皮素>木犀草素>芹菜素>黄芩苷>黄芩素>汉黄芩素,柚皮素、野黄芩素抑制效果不明显。5、野黄芩苷诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡机制初探采用MTT法考察了野黄芩苷在体外对人肝癌HepG-2细胞的增殖抑制作用,以该细胞为研究模型,通过光学显微镜观察野黄芩苷对人肝癌HepG-2细胞形态的影响,流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果表明,野黄芩苷可使HepG-2细胞阻滞于S期,且呈浓度依赖关系,G0/G1期和G2/M期细胞减少,S期细胞增加,表明野黄芩苷使细胞阻滞于S期从而诱导HepG-2细胞凋亡。
