车前草提取物及其有效成分的抗菌活性研究

车前草(Plantago asiatica L.)属车前科植物,在民间多用干燥全草入药。具有祛痰、明目等功效。近年来,随着对车前草研究的不断深入,人们从车前草中分离出了较多有效成分,但是对抗菌活性方面研究较少,并且大多数药理研究都是以车前草粗提物为主。因此本文以分离筛选具有抗菌活性的单体化合物为目的,从而寻找到在抗菌方面具有开发价值的先导化合物。本实验首先对车前草全草进行甲醇冷浸法提取,依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取,通过抗菌实验对萃取出的三个组分的抗菌活性依次进行活性筛选,最终确定车前草的石油醚层和乙酸乙酯层对变形链球菌和金黄色葡萄球菌有较好的抑制性。采用正相硅胶柱色谱、TLC薄层色谱法、反相硅胶色谱、重结晶、制备型薄层层析和羟丙基葡聚糖凝胶色谱方法,对车前草的石油醚层和乙酸乙酯层进行系统分离,共分离出化合物Ⅰ(油酸)、化合物Ⅱ(亚麻酸甲酯)、化合物Ⅲ(亚油酸)、化合物Ⅳ(十六烷酸)、化合物Ⅴ(山楂酸)、化合物Ⅵ(β-谷甾醇)、化合物Ⅶ(齐墩果酸)和化合物Ⅷ(熊果酸)等八个化合物。首先对这八个化合物进行初步活性筛选,发现化合物Ⅰ、化合物Ⅲ、化合物Ⅴ、化合物Ⅶ和化合物Ⅷ有抗菌活性。它们对变形链球菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌和芽孢杆菌这些革兰氏阳性菌有较好的抑制性,其最小抑菌浓度(MIC)值为16～128μg/mL。对大肠杆菌和绿脓杆菌这些革兰氏阴性菌也有一定的抗菌活性,其MIC值为64～256μg/mL。其中化合物V和化合物Ⅷ对大肠杆菌活性尤为突出,比对照药硫酸链霉素要好,MIC值达到了64μg/mL。在对耐药菌的活性测试中,化合物Ⅰ、化合物Ⅴ和化合物Ⅷ也表现出了抑制性,MIC值为16～128μg/mL。最后在细胞毒性实验中发现,这五种化合物在相同的抗菌浓度下对细胞没有毒性伤害；在抗氧化实验中发现,化合物Ⅶ和化合物Ⅷ有一定的抗氧化性；在细菌耐药性的测试中发现,化合物Ⅷ不易产生耐药性,其最小杀菌浓度(MBC)值与MIC值几乎相等。因此化合物Ⅷ不仅具有优秀的抗菌活性和不易产生耐药性的特点,而且对细胞没有毒性伤害,甚至也具有一定的抗氧化性性能,可以作为抗菌活性研究的良好先导化合物之一。