黄芩及其提取物对甲型流感病毒核蛋白表达的体外实验研究

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作者
张清
机构
[1] 南昌大学
关键词
黄芩; 抗流感药物; 核蛋白; 瞬时转染;
D O I
暂无
年度学位
2012
学位类型
硕士
导师
摘要
目的:探讨黄芩及黄芩提取成分对甲型流感病毒核蛋白基因(NP基因)表达的影响,和对核蛋白(NP)表达的影响,为寻找新的抗流感病毒中药提供实验依据。 方法:本实验首先采用细胞病变法(CPE)确定各种药物的实验浓度;然后将真核重组质粒pcDNA3.1(+)/NP通过脂质体介导瞬时转染到HeLa细胞中,将成功转染的HeLa细胞作为靶细胞,转染后48h,取细胞培养上清液,采用胶体金免疫层析试纸法测NP蛋白的表达;取转染后的细胞提取RNA,合成cDNA,采用荧光定量RT-PCR法测NP基因的起始核酸量。本实验设HeLa细胞组、空质粒转染组(转染pcDNA3.1(+))、脂质体组、重组质粒转染组(转染pcDNA3.1(+)/NP)、黄芩水煎剂组、黄芩总黄酮组、黄芩苷组和黄芩素组,共八组。 结果:采用细胞病变法得出各种药物对HeLa细胞的无毒界限分别为:黄芩水煎剂:3906.25μg·ml-1,黄芩总黄酮:0.9765625μg·ml-1,黄芩苷:62.5μg·ml-1,黄芩素:31.25μg·ml-1;药物的实验浓度分别为:黄芩水煎剂:1953.125μg·ml-1,黄芩总黄酮:0.48828125μg·ml-1,黄芩苷:31.25μg·ml-1,黄芩素:15.625μg·ml-1。转染48h后,取细胞培养上清液,采用胶体金免疫层析试纸法测得NP蛋白表达:重组质粒转染组、黄芩总黄酮组、黄芩苷组、黄芩素组为阳性,细胞对照组、脂质体组、空质粒转染组和黄芩水煎剂组为阴性;从转染后的细胞中提取RNA,合成cDNA,并进行荧光定量RT-PCR测试,得到一条标准曲线:Y=-3.455X+48.119;根据标准曲线方程计算出各组的NP基因起始核酸量分别为:细胞对照组:(0.6613±0.1020)×10~5copies·μl-1,空质粒转染组:(0.2520±0.0946)×10~5copies·μl-1,脂质体组:(0.4750±0.1943)×10~5copies·μl-1,重组质粒转染组为(81.4500±29.6597)×10~5copies·μl-1,黄芩水煎剂组:(29.6250±7.6596)×10~5copies·μl-1,黄芩总黄酮组:(61.0250±25.3261)×10~5copies·μl-1,黄芩苷组:(27.7250±12.8484)×10~5copies·μl-1,黄芩素组:(31.8250±8.2152)×10~5copies·μl-1。采用t检验对数据进行统计学分析,重组质粒转染组与细胞对照组比较,t=5.448,P=0.012<0.05,具有统计学意义;与空质粒转染组比较,t=5.475,P=0.012<0.05,具有统计学意义;与脂质体组比较,t=5.460,P=0.012<0.05,具有统计学意义;与黄芩水煎剂组比较,t=3.384,P=0.015<0.05,具有统计学意义;与黄芩总黄酮组比较,t=1.047,P=0.335>0.05,不具有统计学意义;与黄芩苷组比较,t=3.324,P=0.016<0.05,具有统计学意义;与黄芩素组比较,t=3.225,P=0.018<0.05,具有统计学意义。 结论:黄芩水煎剂能够抑制甲型流感病毒NP基因和NP蛋白的表达。黄芩总黄酮对甲型流感病毒NP基因和NP蛋白的表达无影响。黄芩苷和黄芩素能够下调甲型流感病毒NP基因起始量。
引用
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页数:58
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