菜籽多糖的分离、纯化及特性研究

以低温冷榨菜籽粕为材料、低碱浸提和串联超滤为主要分离手段,进行菜籽蛋白联产菜籽粗多糖(PRM)的效果研究。采用DEAE-纤维素树脂从PRM中分离出多糖单组分。探讨了PRM的免疫活性及体内抗氧化活性;对菜籽多糖单组分的化学组成进行分析与分子表征,同时考察其体外抗氧化活性,为菜籽多糖的工业化生产和应用提供理论依据。 PRM的制备、菜籽多糖单组分的分离、菜籽多糖单组分的化学组成分析与分子表征。低温冷榨菜籽粕依次通过脱脂预处理,0.3%NaOH溶液浸提,溶液过滤去除大颗粒杂质后,Sevage(氯仿:正丁醇,4:1)试剂去除溶液中蛋白质。上清液依次经过透析、浓缩、95%酒精沉淀后,收集的多糖依次经过无水乙醇、丙酮和乙醚洗涤后,得到粗多糖(PRM)。PRM再用DEAE-纤维素-52层析柱进一步分离,依次用蒸馏水和0.05MNaCl溶液洗脱。相应的流出液分别经透析和冷冻干燥,得到两个菜籽多糖单组分。分析了菜籽多糖单组分的中性多糖、硫酸根、蛋白质和糖醛酸含量,氨基酸组成和分子量;采用GC-MS法分析菜籽多糖单组分中的单糖组成;通过刚果红试验检验菜籽多糖单组分的多股螺旋结构。 菜籽多糖中试制备工艺研究。考察了浸提、粉碎和膜分离条件对多糖得率和纯度的影响。确定了菜籽多糖的最佳的浸提、粉碎和膜分离条件。并且,采用高效液相色谱法对得到的菜籽多糖的分子量范围及正态分布进行研究。 探讨了PRM的免疫活性。以小白鼠为试验动物,分成对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组四组,连续灌胃30天后,测定小白鼠的胸腺和脾脏指数,吞噬细胞的吞噬能力,脾细胞和腹腔巨噬细胞的增殖,迟发型过敏反应和溶血空斑和溶血素抗体形成等免疫指标,综合评价PRM对小白鼠的免疫功能的影响。 研究了PRM的体内抗氧化活性。选用生理盐水为载体,维生素C和维生素E作为阳性对照组,灌胃喂养小白鼠PRM。喂养30天后,测定被饲小鼠的血清、肝脏、心脏和小肠中谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活力,总抗氧化力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量,评价PRM对试验小鼠抗氧化能力的影响。试验结果表明:菜籽多糖能显著性提高小白鼠体内GSH-Px、SOD和CAT的活性及T-AOC水平,降低MDA的含量。因此,PRM能提高小白鼠的体内抗氧化能力。 以维生素C为阳性对照组,以超氧阴离子自由基、羟基自由基、一氧化氮自由基的捕获能力,还原力及对线粒体脂质氧化的抑制率为指标,评价两个菜籽多糖单组分的体外抗氧化活性。试验结果表明:两个菜籽多糖单组分不仅表现出较好的还原力和对线粒体脂质氧化的抑制能力,而且对超氧阴离子自由基、一氧化氮自由基和羟基自由基都具有较好的捕获能力。此外,研究发现超氧阴离子自由基的捕获能力和多糖分子中蛋白质含量之间,还原力和硫酸根含量之间存在正相关性。研究表明菜籽多糖单组分具有明显的体外抗氧化活性。