几种合成色素的同时检测及其对细胞毒性研究

随着合成色素在食品行业中得到越来越广泛的应用，合成色素的快速检测和毒性研究也已成为近年来研究的热点。本研究建立了同时测定食品中柠檬黄等21种合成色素的高效液相色谱方法；建立了快速准确同时测定食品中红2G等7种合成色素的高效液相色谱—串联三重四级杆质谱法方法；同时，研究了红2G、酸性绿S、专利蓝V、喹啉黄、碱性橙和碱性嫩黄O等六种合成色素对HL-7702细胞的毒性。主要研究结果有： 1.建立了利用反相高效液相色谱法同时测定食品中柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮黑、红2G、诱惑红、酸性绿S、亮蓝、偶氮玉红、酸性橙I、碱性嫩黄O、专利蓝V、碱性橙、酸性橙Ⅱ、赤藓红、酸性黄36、酸性红26、酸性红52和罗丹明B等21种合成色素的方法。色谱条件为： C18柱(4.6mm×250mm)，二极管阵列检测器，乙腈/0.05mol/L乙酸铵梯度洗脱，流速1.0mL/min，柱温35℃,检测波长为240、410、510和627nm，进样量5μL。结果表明，在2～40μg/mL范围内，各色素检测线性关系良好，回收率在75%以上，各种色素的最低检出限为2～10μg/mL不等。 2.建立了一种快速、准确的食品中红2G、偶氮玉红、酸性红26、酸性红52、喹啉黄、酸性绿S和专利蓝V等七种合成色素的高效液相色谱-串联三重四级杆质谱测定方法。样品经提取、聚酰胺小柱净化、解析处理后，采用XDB-C18色谱柱，以乙腈/0.02mol/L乙酸铵为流动相，梯度洗脱分离后，在负离子和多反应监测（MRM）模式下进行定性和定量分析。在优化的检测条件下，红2G、偶氮玉红、酸性红26、酸性红52、喹啉黄、酸性绿S和专利蓝V的检出限为0.25～30ng/mL；在0.5～1000ng/mL浓度范围内线性良好，相关系数均大于0.99；平均回收率在85%以上，相对标准偏差均小于10%。 3.初步研究红2G、喹啉黄、专利蓝V、酸性绿S、碱性嫩黄O和碱性橙等六种合成色素对HL-7702细胞的毒性影响：六种合成色素作用于细胞培养后，通过镜下观察细胞形态变化，采用MTT法检测细胞毒性，进行毒性评价。镜下观察结果显示：各组细胞与对照组比较均有不同程度的变化。采用MTT法测定红2G、喹啉黄、专利蓝V、酸性绿S、碱性嫩黄O和碱性橙对细胞的毒性作用表明，这六种色素对HL-7702细胞均有一定的抑制作用，且MTT值呈现剂量依赖性，随着浓度的变化，MTT值均呈现一定的变化。同时，研究表明红2G与酸性绿S、红2G与碱性嫩黄O、红2G与碱性橙的毒性作用均为相加作用。