牡丹组织培养的初步研究

本文以牡丹不同品种的鳞芽为外植体,探讨了不同生长调节物质和不同环境因子在鳞芽的萌发、增殖以及诱导生根过程中的作用,分析不同培养过程中主要影响因子有效浓度的范围;同时以牡丹幼嫩叶柄、叶片为外植体,探讨在愈伤组织的诱导、增殖以及分化过程中主要的影响因子及其有效浓度范围,并筛选出牡丹愈伤组织培养过程中防止褐化的有效措施。实验结果如下: 1.采用0.1%HgCl2对外植体进行处理,结果表明:不同外植体采用处理时间有所差异,牡丹鳞芽合适时间以5～7min较好。叶柄处理时间以5min为宜。 2.采用‘洛阳红’、‘胡红’、‘肉芙蓉’、‘鲁荷红’、‘乌龙捧盛’和‘朱砂垒’6个牡丹品种的鳞芽诱导培养,结果表明:品种之间的增殖率差异表现为‘乌龙捧盛’>‘鲁荷红’>‘胡红’>‘洛阳红’>‘朱砂垒’>‘肉芙蓉’,综合萌芽率和增殖系数,‘乌龙捧盛’品种表现较好。 3.以‘乌龙捧盛’鳞芽为材料,比较不同的植物生长调节物质（NAA、IAA和6-BA）和不同的基本培养基类型(1/2MS、MS、WPM和MS+Ca2+)对鳞芽增殖的影响,结果表明:在鳞芽增殖过程中,各个因素对鳞芽增殖系数的影响依次为:NAA>基本培养基类型>6-BA>IAA;培养基MS+Ca2+（WPM）+6-BA2.0 mg.L-1+IAA0.3 mg.L-1和MS+Ca2++6-BA1.0 mg.L-1+IAA0.1 mg.L-1有利于试管苗的增殖。三个继代时间（35d,45d和55d）)相比较,继代培养时间应低于35d。 4.在生根培养过程中,通过生根率、平均根数、平均根长等生长指标调查,结果表明:IBA和基本培养基类型是影响牡丹试管苗生根率的主要因素,培养基1/2MS+IBA1.0 mg.L-1+IAA1.0mg.L-1+蔗糖20 g.L-11有利于根的诱导;基本培养基类型和蔗糖浓度是影响牡丹试管苗平均根长的重要因素,培养基WPM+IBA1.0 mg.L-1+IAA1.0 mg.L-1+蔗糖40 g.L-11有利于根的生长;IAA浓度和蔗糖浓度是影响牡丹试管苗根数的重要因素,培养基1/4MS+IBA3.0 mg.L-1+IAA3.0 mg.L-1+蔗糖30 g.L-1和培养基1/2MS+Ca2+（WPM）+IAA3.0 mg.L-1+蔗糖40 g.L-1有利于根数的增加;综合比较培养基1/2MS+Ca2++IBA1.0 mg.L-1+IAA1.0 mg.L-1+蔗糖20～30 g.L-1有利于试管苗的生根率、平均根长和生根数的增加。 5.分别采用叶柄、叶片进行愈伤组织诱导、增殖及分化培养,结果表明:各个因素对诱导愈伤组织的影响程度依次为:6-BA>2,4-D>材料类型>NAA>IAA:采用近枝干叶柄为材料,并培养于1/2MS+2,4-D0.5 mg.L-1+NAA1.0 mg.L-1+IAA0.2 mg.L-1培养基中,愈伤组织诱导率最高:在愈伤组织的增殖培养过程中,6-BA和NAA是其主要影响因素,以1/2MS+NAA0.3 mg.L-1+6-BA2.0mg.L-1+IAA0.5 mg.L-1为培养基,增殖系数较高。 6.采用不同的措施防止愈伤组织培养过程中褐化,结果表明:木质化程度低的材料褐化现象较木质化程度较高的材料轻;在采用的三种基本培养基类型（MS,1/2MS和WPM）中,褐化率相当,但褐化程度依次为MS>1/2MS>WPM;母株预处理、暗培养和在培养基中添加PVP均能有效地降低褐化率和褐化程度,而生长调节物质在牡丹愈伤组织培养过程中对褐化的影响较小。