共 5 条
人蛋白激酶CK2α′亚基在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组蛋白的纯化与性质鉴定
被引：21
作者：
陈小文
刘新光
梁景耀
梁念慈
机构：
[1] 广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东医学院生物化学与分子生物学研究所湛江,湛江,湛江,湛江
来源：
基金：
广东省科技计划;
广东省自然科学基金;
关键词：
人蛋白激酶CK2α′亚基;
克隆;
pT7-7;
GST融合表达;
蛋白纯化;
D O I：
10.13865/j.cnki.cjbmb.2004.02.007
中图分类号：
Q814 [酶工程];
学科分类号：
082203 ;
摘要：
通过RT PCR从HL 6 0细胞获得人蛋白激酶CK2α′亚基编码区cDNA ,将NdeⅠ HindⅢ双酶切的PCR产物和pT7 7表达载体进行定向克隆、细菌转化、电泳初筛和限制性酶切分析鉴定 .随机挑选阳性克隆进行DNA测序确证 ,筛选含与已知序列完全相符的重组质粒 (命名为pTCKA′) .将其转化BL2 1(DE3)菌 ,IPTG诱导后未见高效特异表达 .然后将人CK2α′cDNA亚克隆至GST融合蛋白表达载体 ,经同样转化和诱导步骤后可见一蛋白特异高效表达 .Western印迹结果证明 :该蛋白能与兔抗人CK2α′3 3 3 3 50 肽段抗血清发生特异性免疫反应 .采用GSH Sepharose 4B柱纯化 ,凝血酶酶切 ,最后从 4g细菌获 4 4mg纯化重组蛋白 .通过性质鉴定和酶动力学分析证明 :克隆、表达和纯化的重组蛋白是有生物学活性的人CK2α′亚基 .
引用
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