黄病毒属TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法建立

被引：4

作者：

郭金金 ^{[1
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孙肖红 ^{[2
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燕清丽 ^{[2
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方艳辉 ^{[1
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杨鹏飞 ^{[2
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魏莲 ^{[2
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张晓龙 ^{[2
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姚李四 ^{[2
]}

机构：

[1] 承德医学院

[2] 中国检验检疫科学研究院

来源：

中国公共卫生 | 2012年 / 04期

关键词：

黄病毒属; TaqMan探针荧光定量RT-PCR;

D O I：

暂无

中图分类号：

R373.3 [节肢动物传播的病毒（虫媒病毒）];

学科分类号：

100103 ; 100705 ;

摘要：

目的建立用于检测黄病毒属的TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法。方法从GenBank中检索黄病毒属代表株的全基因序列,通过DNAstar进行序列比对和blast进行保守序列搜索和分析,用Beacon Designer 7.0软件进行引物和TaqMan探针设计,以乙脑毒株MB090509 RNA为模板,优化反应条件并应用于现场蚊虫标本检测。结果确定黄病毒属TaqMan探针荧光定量RT-PCR反应条件为:45℃15 min,95℃10 min,95℃10 s→54℃45 s,40次循环,引物和探针终浓度为200 nmol/L。灵敏度为常规RT-PCR方法 100倍,检出限2.9×10-3噬斑形成单位(PFU)/mL,与甲病毒属、东南亚十二节段RNA病毒属、布尼亚病毒属均无交叉反应。从161份现场蚊虫标本中检测出11份阳性标本,经病毒分离、测序均被证实为乙脑病毒。结论本研究建立的黄病毒属TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法具有广泛应用价值。

引用

页码：530 / 532

页数：3

共 8 条

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