枯草芽孢杆菌C-36内切葡聚糖酶基因的克隆及其在大肠杆菌中融合表达

以自行分离筛选出的天然枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）C-36的染色体DNA为模板,PCR扩增得到含有内切葡聚糖酶基因的DNA片段,将其克隆到pMD-18T载体中,序列分析表明,克隆得到的DNA片段全长1 602 bp,编码一个含有499个氨基酸的多肽。与其他芽孢杆菌内切葡聚糖酶基因序列比对,其核苷酸同源率为90%93%,其编码的氨基酸序列的同源性在90%98%,已将此基因注册GenBank（DQ782954）。将含内切葡聚糖酶基因的重组克隆质粒进行亚克隆,用KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切后,与相同酶切的表达载体pET-32 a相连接,并导入大肠杆菌BL21中表达。蛋白质电泳实验结果表明在6.47×104处有表达蛋白带。经测定表达蛋白比酶活力达99.02 U/mL,为出发菌C-36（63.78 U/mL）的1.55倍。