实时荧光定量PCR分析中毛果杨内参基因的筛选和验证

实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术具有高灵敏性、高保真性和高特异性,被广泛应用于基因表达的分析。在数据处理过程中,选用稳定表达的基因作为内参基因对准确分析实验结果非常关键。以毛果杨(Populus trichocarpa)的不同组织以及锌胁迫下的组培苗为材料,使用荧光定量PCR方法分析了TUA8、TUB6、ubiquitin、GAPDH、actin、18S rRNA和EF1α7个看家基因的表达情况。通过geNorm、NormFinder和BestKeeper 3个程序的综合分析,发现actin、ubiquitin、EF1α和18S rRNA的稳定性较好,可用作毛果杨基因表达研究的内参基因;而TUB6在不同组织中稳定性最差;GAPDH在锌胁迫下的组织中稳定性最差,因此不适宜作为内参基因。毛果杨NAC基因的表达分析,进一步验证了上述结果。该研究对采用qRT-PCR方法分析毛果杨基因表达过程中内参基因的选择具有指导作用,同时对揭示NAC基因的功能也有一定的意义。