当归拈痛汤调控PERK/Bip通路减轻膝关节骨性关节炎大鼠软骨损伤实验研究

目的 观察当归拈痛汤对膝关节骨性关节炎（KOA）大鼠软骨损伤的影响，并分析其作用机制。方法 50只SD雄性大鼠通过随机数表法分为对照组（n=10）与造模组（n=40），通过木瓜蛋白酶关节腔内注射法建立KOA大鼠模型。将造模成功大鼠随机分为模型组（n=10），当归拈痛汤组（低、中、高剂量，n=10）。当归拈痛汤组分别按照低剂量6.5 g/kg、中剂量13.0 g/kg、高剂量26.0 g/kg的药量进行灌胃，对照组与模型组给予等量生理盐水灌胃，连续给药1个月。采用游标卡尺测量大鼠双侧膝关节直径；通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-1β(IL-1β)水平；采用甲苯胺蓝染色观察各组大鼠膝关节软组织病理变化；通过实时荧光定量PCR(Real time-PCR)与免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、免疫球蛋白结合蛋白（Bip）、半胱胺酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)mRNA与蛋白表达水平。结果 给药期间对照组大鼠未见膝关节肿胀，与对照组比较，模型组大鼠双侧膝关节直径显著增加，采用中、高剂量当归拈痛汤治疗后大鼠膝关节直径显著缩短（P<0.05）；病理观察结果显示模型组大鼠膝关节软骨局部裂隙缺损，采用中、高剂量当归拈痛汤治疗后大鼠膝关节软骨局部裂隙缺损症状显著改善；与对照组比较，模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量，PERK、Bip、Caspase-9 mRNA与蛋白表达水平均显著提高，采用当归拈痛汤治疗可以下调大鼠血清TNF-α、IL-1β含量，PERK、Bip、Caspase-9 mRNA与蛋白表达水平，中、高剂量当归拈痛汤组大鼠以上各项指标与模型组比较均有统计学意义（P<0.05）。结论 当归拈痛汤可以有效减轻KOA大鼠膝关节肿胀程度，降低血清炎性细胞因子含量，减轻软骨损伤，其机制可能与调控PERK/Bip通路，下调PERK、Bip、Caspase-9 mRNA与蛋白表达水平有关。