毕赤酵母菌分泌表达重组抑肽酶的高密度发酵工艺研究

目的:对毕赤酵母高密度表达重组抑肽酶的发酵工艺进行探讨。方法:先通过摇瓶培养方法,确定表达抑肽酶的毕赤酵母在BSM培养基中生长所需的最佳配方。在此基础上,采用分批补料培养方法,对毕赤酵母pSA/GS115进行高密度发酵。紫外吸收法测定重组抑肽酶竞争性抑制胰蛋白酶对底物BAEE的水解活性。结果:BSM培养基中毕赤酵母生长必需的最佳配方为甘油40 g.L-1、氨水单次补加量0.1%、甲醇流加量1%。经过毕赤酵母高密度发酵,发酵液上清中蛋白的表达量为37.08 mg.L-1,目的蛋白活性达到4 450 BAEEU.ml-1,比摇瓶培养表达提高了8倍。结论:本发酵工艺可实现酵母工程菌的高密度表达发酵,其发酵产物具有较高的生物活性,为下一步大规模化制备抑肽酶奠定了基础。