百子莲茎尖分生组织蛋白双向电泳体系的建立

被引：2

作者：

张洁 ^{[1
]}

孙一凡 ^{[2
]}

张荻 ^{[1
]}

申晓辉 ^{[1
]}

机构：

[1] 上海交通大学农业与生物学院

[2] 上海交通大学生命科学技术学院

来源：

上海交通大学学报(农业科学版) | 2015年 / 33卷 / 03期

基金：

中国博士后科学基金;

关键词：

百子莲; 茎尖分生组织; 蛋白提取; 蛋白酶抑制剂; 双向凝胶电泳;

D O I：

暂无

中图分类号：

S682.32 [水生植物];

学科分类号：

090706 ;

摘要：

以‘蓝色大花’百子莲(Agapanthus praecoxssp.orientalis‘Big blue’)茎尖分生组织为材料,对比研究了不同提取与裂解方法制备蛋白样品以排除多酚、多糖及核酸物质对蛋白双向电泳体系(Two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)的干扰。提取过程采用TCA/丙酮沉淀法和超声波破碎法;蛋白裂解过程中分别使用苯甲基磺酰氟(Phenylmethanesulfonyl Fluoride,PMSF)和乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid,EDTA)、Cocktail(广谱性)蛋白酶抑制剂、核酸酶Nuclease Mix和2-D Clean-Up蛋白纯化试剂盒。制备的各蛋白样品经过7cm IPG(pH 3～10)胶条上样、电泳后发现,使用TCA/丙酮沉淀法提取蛋白,裂解液中加入Cocktail蛋白酶抑制剂裂解后,用2-D Clean-Up试剂盒所制备的样品其双向凝胶电泳图谱效果最好,获得蛋白点数量最多,且蛋白等电点pI主要分布于4～8之间。随后,应用分辨率更高的24cm IPG(pH 4～7)胶条进行电泳效果的验证,蛋白点在凝胶的2个方向上均得到了较好地分离,经过ImageMaster 2-D Platinum5.0软件分析后共检测到有效蛋白点820个。本研究初步建立了百子莲茎尖分生组织蛋白双向凝胶电泳体系,为后续开展百子莲属植物蛋白质组学研究提供了重要的技术保障。

引用

页码：43 / 52

页数：10

共 27 条

[1] 甜瓜叶片蛋白质2-DE中IPG胶条及染色方法的选择 [J].