黄连ISSR反应条件优化的研究

被引：25

作者：

陈大霞 ^{[1
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李隆云 ^{[1
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鲁成 ^{[2
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钟国跃 ^{[1
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瞿显友 ^{[1
]}

彭锐 ^{[1
]}

机构：

[1] 重庆市中药研究院

[2] 西南农业大学蚕桑学重点实验室

来源：

植物研究 | 2007年 / 01期

基金：

国家科技攻关计划;

关键词：

黄连; ISSR; 反应体系; 热循环参数;

D O I：

暂无

中图分类号：

S567.52 []; Q943.2 [植物基因工程];

学科分类号：

摘要：

以黄连(味连,Coptis ChinensisFranch.)基因组DNA为模板,通过单因子、双因子实验研究了ISSR反应体系中主要成分(Mg2+、dNTP、引物、模板、TaqDNA聚合酶)以及热循环参数(退火温度、循环数、变性时间、退火时间、延伸时间)对扩增结果的影响,并找出各自的最适条件,建立了适合黄连ISSR分析的反应体系和扩增程序,即在25μL反应体系中,内含1×PCR buffer、1.5mmol.L-1Mg2+、200μmol.L-1dNTP、0.3μmol.L-1引物、40ng模板、1UTaqDNA聚合酶。扩增程序为94℃预变性5min,然后进行35个循环:94℃变性30s,(据不同引物的退火温度)复性1min,72℃延伸1.5min,循环结束后72℃延伸7min,-4℃保存。这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术进行黄连鉴定及种质遗传多样性分析提供了一个标准化程序。

引用

页码：77 / 81

页数：5

共 13 条

[1] 利川黄连小檗碱含量 [J].

郭志刚 ;

赵琳 ;

孙瑞强 ;

孙素琴 ;

王立群 .

中国医学科学院学报, 2004, (06) :618-621

[2] 生态技术栽培黄连的质量评价 [J].

王立群 ;

叶晓川 ;

邓芬 ;

张丽萍 ;

校合香 .

中国医学科学院学报, 2004, (06) :608-610

[3] 华木莲的遗传多样性研究 [J].

廖文芳 ;

夏念和 ;

邓云飞 ;

郑庆衍 .

云南植物研究, 2004, (01) :58-64

[4] 怀地黄ISSR扩增条件优化的研究(英文) [J].

周延清 ;

景建洲 ;

李振勇 ;

浩健 ;

贾敬芬 .

西北植物学报, 2004, (01) :6-11

[5] 利用SSR和ISSR标记技术构建西瓜分子遗传图谱 [J].

易克 ;

徐向利 ;

卢向阳 ;

许勇 ;

肖浪涛 ;

王永健 ;

康国斌 .

湖南农业大学学报(自然科学版), 2003, (04) :333-337

[6] 桦树ISSR-PCR反应体系的优化 [J].

姜静 ;

杨传平 ;

刘桂丰 ;

武金华 ;

范志勇 .

生态学杂志, 2003, (03) :91-93

[7] 简单重复序列区间(ISSR)引物反应条件优化与筛选 [J].

余艳 ;

陈海山 ;

葛学军 .

热带亚热带植物学报, 2003, (01) :15-19

[8] 水稻光温敏核不育系的ISSR和SSR遗传分析比较 [J].

李进波 ;

江良荣 ;

李春海 ;

牟同敏 .

分子植物育种, 2003, (01) :42-47

[9] 苹果品种ISSR指纹图谱构建 [J].

宣继萍 ;

章镇 ;

房经贵 ;

高志红 ;

车胜利 .

果树学报, 2002, (06) :421-423

[10] 杨梅不同品种的ISSR分析 [J].

邱英雄 ;

傅承新 ;

孔航辉 .

农业生物技术学报, 2002, (04) :343-346

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