pH值对绿色木霉(Trichoderma viride)产纤维素酶的影响

采用微晶纤维素为唯一诱导性碳源,对绿色木霉(Trichoderma viride)在摇瓶发酵过程中控制与不控制pH产纤维素酶进行比较。控制pH时胞外蛋白浓度为0.72 mg/mL比不控制pH时提高43%;FPA、EG、CB和CBH酶活为15.0U/mL,120.0U/mL,1.75U/mL,0.85U/mL分别是不控制pH时的2.1、2.3、11.7和1.7倍。在不同pH下测定纤维素酶液各酶活,表明pH值显著影响纤维素酶各单酶酶活。在pH2.7时,β-葡萄糖苷酶酶活仅为pH4.8时酶活的4%;pH回调试验结果表明β-葡萄糖苷酶对pH敏感,并在催化功能上发生不可逆变化。对纤维素酶液添加分离得到的各单酶,当添加β-葡萄糖苷酶时最多可以提高FPA酶活20%。因此β-葡萄糖苷酶是影响综合酶活的关键酶。通过拉曼光谱检测出β-葡萄糖苷酶在pH5.0有活性状态下,酶蛋白主链结构主要为α-螺旋和无规则卷曲;在pH2.0没有活性状态下,酶蛋白主链结构的无规则卷曲发生较大变化,α-螺旋也受到一定影响。这说明pH对β-葡萄糖苷酶构象的改变是造成其活性变化的主要原因。