定量检测牛奶中蛋白质ELISA方法的建立

本试验旨在建立特异检测牛奶蛋白质含量的ELISA方法。利用提纯酪蛋白免疫试验动物,获得针对酪蛋白的多克隆抗体;利用棋盘格试验确定抗原抗体的最佳作用浓度,并优化各步骤反应条件;根据标准样品建立牛奶中蛋白质含量的定量ELISA检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、检测范围及重复性进行评价。通过试验确定封闭液为1%BSA,37℃孵育120 min;血清抗体工作浓度为1∶12000稀释,37℃孵育90 min;酶标二抗最适浓度为1∶3000稀释,37℃孵育30 min。牛奶酪蛋白检出范围为0.063～0.500μg/mL;该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,回归率范围为97.6%123%。成功建立了牛奶蛋白含量的定量ELISA检测方法。