基于裂解酶与ATP生物发光法特异定量检测炭疽杆菌方法的研究

被引：2

作者：

张博 ^{[1
,2
]}

康怀兴 ^{[2
]}

米志强 ^{[2
]}

安小平 ^{[2
]}

张飞雄 ^{[1
]}

童贻刚 ^{[2
]}

机构：

[1] 首都师范大学生命科学学院

[2] 军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室

来源：

生物技术通讯 | 2014年 / 25卷 / 01期

关键词：

炭疽杆菌; 噬菌体裂解酶; 萤光素酶; ATP生物发光法; 定量检测;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

目的:原核表达炭疽杆菌噬菌体γ裂解酶(PlyG)和萤光素酶(Luc),结合这2种酶建立特异定量检测炭疽杆菌的方法。方法:PCR扩增得到带有His标签的裂解酶基因和萤光素酶基因,构建重组表达载体pET22b-plyG和pET22b-luc,转化至大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达,过镍柱纯化得到目的蛋白;利用裂解酶裂解和ATP生物发光定量检测蜡样芽孢杆菌RSVF1,与平板计数法对比建立线性关系。结果:表达了炭疽杆菌噬菌体γ裂解酶和萤光素酶,并建立了特异定量检测蜡样芽孢杆菌RSVF1的方法,与平板计数方法具有显著的线性相关。结论:因炭疽杆菌与蜡样芽孢杆菌RSVF1均对PlyG具有较强的敏感性,故本研究所建立的将炭疽杆菌噬菌体γ裂解酶与萤光素-萤光素酶系统相结合的检测方法对现场或临床定性定量检测炭疽杆菌提供了理论支持,具有良好的应用前景。

引用

页码：9 / 12+20 +20

页数：5

共 11 条

[1]

Specific electrochemical phage sensing for Bacillus cereus and Mycobacterium smegmatis.[J].Miri Yemini;Yaron Levi;Ezra Yagil;Judith Rishpon.Bioelectrochemistry.2006, 1

[2]

ANTHRAX.[J].Michele Mock;Agnes Fouet.Annual Review of Microbiology.2001, 1

[3] 炭疽杆菌检测方法的研究现状与展望 [J].