乳糖诱导重组尿酸酶基因在大肠杆菌中的表达

被引：10

作者：

邓永康 ^{[1
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吴民泸 ^{[2
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刘盛邦 ^{[1
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杜林方 ^{[1
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伍黎黎 ^{[1
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李曼 ^{[1
]}

孟延发 ^{[1
]}

机构：

[1] 四川大学生命科学学院

[2] 成都医学院医学检验系

来源：

中国生物工程杂志 | 2009年 / 29卷 / 07期

关键词：

尿酸酶; 乳糖; 诱导表达; 优化; 高密度发酵;

D O I：

10.13523/j.cb.20090714

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

对用乳糖替代异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组产朊假丝酵母尿酸酶基因在E.coliJM109(DE3)中表达进行了研究,拟建立一种高效低成本的生产重组尿酸酶的工艺路线。通过摇瓶试验对诱导所采用的乳糖浓度,诱导时机和诱导持续时间进行了优化,并考察在乳糖诱导下的目的产物表达动力学,随后在5L发酵罐上进行扩大化培养以验证摇瓶优化的结果,进一步将乳糖作为诱导剂应用于高密度发酵过程。实验结果表明乳糖诱导的最佳浓度为5g/L,最佳诱导时机是对数生长期中后期,诱导持续时间为9～10h;按照优化的条件在摇瓶和5L发酵罐上进行分批培养,重组尿酸酶最大表达量可达菌体总蛋白的26%左右,可溶性蛋白的36%左右,略高于IPTG的诱导效果;高密度发酵过程菌体终密度达到OD600值40以上,尿酸酶表达量占菌体总蛋白25%左右。

引用

页码：74 / 79

页数：6

共 11 条

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