咖啡酸衍生物WSY6对黑素细胞氧化应激损伤的保护作用及机制研究

目的探讨咖啡酸衍生物WSY6对过氧化氢(H2O2)诱导的黑素细胞氧化损伤的保护作用和潜在分子机制。方法体外培养原代人表皮黑素细胞, 分为对照组(不做任何处理)、H2O2组(1 mmol/L H2O2处理)和6.25、12.5、25 μmol/LWSY6组(分别用6.25、12.5、25 μmol/L WSY6预处理1 h后再用1 mmol/L H2O2处理1 h)。继续培养24 h后, 用MTS法测定黑素细胞存活率, 乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH释放量。部分黑素细胞分为抑制剂组(用p38抑制剂预处理1 h, 再用1 mmol/L H2O2处理1 h)和H2O2组(直接用1 mmol/L H2O2处理1 h), 处理完成后继续培养24 h, 用试剂盒检测LDH的释放量。部分黑素细胞用25 μmol/L WSY6预处理1、2、4 h后, 再用H2O2处理1 h, 流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;部分黑素细胞用6.25、12.5、25 μmol/L WSY6处理1 h后, 再用H2O2处理1 h, Western印迹法检测细胞色素C(cyto-c)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9和磷酸化丝裂原活化的蛋白激酶(p-p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)及c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达。结果与对照组相比, H2O2组黑素细胞存活率明显降低(29.22% ± 1.31%, P < 0.05), 细胞内LDH释放量增加(47.19% ± 4.85%, P < 0.05), ROS水平明显升高(18.37 ± 1.59, P < 0.05), caspase-3和caspase-9的表达亦均升高。与H2O2组相比, 6.25、12.5、25 μmol/L WSY6组细胞存活率明显增加(52.48% ± 1.17%、60.21% ± 0.25%、78.32% ± 1.73%, P < 0.05), LDH释放量明显下降(21.99% ± 0.22%、15.38% ± 0.45%、13.18% ± 0.38%, 均P < 0.05), 25 μmol/L WSY6处理1、2、4 h组细胞内ROS显著下降(7.59 ± 1.00、6.22 ± 0.52、5.15 ± 0.48, 均P < 0.05)。同时p38抑制剂组黑素细胞LDH释放量较H2O2组显著下降(P < 0.05)。Western印迹法显示, WSY6预处理后, 与H2O2组相比, caspase-3和caspase-9表达明显降低, p-p38表达下降, 但p-ERK和p-JNK表达无明显变化;同时WSY6组p38 MAPK下游产物p-p53表达也下降, 且WSY6浓度越高, 下降越明显。结论 WSY6对H2O2诱导的黑素细胞氧化应激损伤有显著的保护作用, 可能通过p38 MAPK途径发挥作用。