膝骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)是一种以骨关节软骨退变,软骨下骨重建(增厚,骨萎缩,骨囊肿),韧带和半月板变性,关节囊肥大为特征的退行性骨关节疾病。中老年人中发病率和患病率居高不下,给其身体上和精神上带来诸多损害,严重者给日常生活带来诸多困扰,给社会、家庭增添了一定的负担。西医方法主要包括药物口服、物理治疗、关节腔注射、手术治疗等治疗方案。但是目前没有一种令人十分满意的治疗方法。健骨方为湖北中医大师李同生教授验方,能促进关节面的修复,采用健骨方治疗早中期KOA取得了较好的效果。前期兔实验模型研究结果表明健骨方能够减轻关节炎症,改善关节软骨功能,但其确切的作用机理有待深入研究。本项目围绕健骨方治疗鼠膝KOA前后组织形态、p38 MAPK的表达、Ⅰ、Ⅱ型胶原降解的过程,探讨健骨方治疗KOA影响p38MAPK信号转导延缓关节软骨退变的作用机制。目的:观察健骨方干预KOA模型对膝骨关节软骨的影响;健骨方干预KOA模型对软骨细胞中Ⅰ、Ⅱ型胶原分泌表达的影响;健骨方干预KOA模型对p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)表达的影响。方法:将雌雄大鼠采用随机数字表法随机分成四组,正常组即为假手术组+生理盐水灌胃、模型组即为手术组+生理盐水灌胃、健骨方组即为手术组+健骨方灌胃、阳性对照组为手术组+塞来昔布口服。治疗3个月后,断颈处死正常组、健骨方组、模型组及阳性对照组大鼠。分别取出右侧后肢膝关节软骨,镜下观察上述各组关节软骨形态学改变;用RT-PCR法分别检测关节软骨细胞中的Ⅰ、Ⅱ型胶原m RNA的表达,以了解健骨方对Ⅰ、Ⅱ型胶原的影响;用Western blot法检测关节软骨细胞中p38的含量的变化,了解健骨方对p38 MAPK信号转导通路中蛋白激酶的影响。结果:电镜结果我们发现模型组关节软骨组织红染表明坏死,而健骨方组关节软骨没有像模型组坏死而是关节软骨粗糙不平,形成溃疡,在少量的坏死区仍可见软骨基质。病理改变Mankin,s评分结果示:模型组与正常组、健骨方组与模型组比较差异都有统计学意义(p<0.05,p=0.000);健骨方能够降低关节软骨细胞中的Ⅰ型胶原m RNA的表达,增加Ⅱ型胶原分泌表达;p38 MAPK磷酸化产物在各个组中均有表达,各组相比(p<0.05,p=0.007),有统计学意义,说明骨性关节炎发病过程中确实引起了p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路的激活。健骨方组与模型组相比,健骨方组p38 MAPK磷酸化产物表达呈下降趋势。结论:健骨方对Hulth法建立的膝骨关节炎鼠模型的关节软骨损伤有明显的修复作用。膝骨关节炎的发病机制可能与p38MAPK介导的细胞信号通路密切相关。通过干预和调控p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路信号的表达和活性,将有希望成为治疗膝骨关节炎的一种新的有效途径。
