沙苑子黄酮抗辐射作用及作用机制的研究

目的:研究沙苑子黄酮(Flavonoids of Astragalus complanatus,FAC)抗辐射损伤的作用及作用机制。 方法:①本实验建立60Coγ射线小鼠损伤模型,观察FAC对辐射小鼠生存的保护作用,计算生存率;测定脾脏指数、胸腺指数和外周血象;用MTT方法进行ConA及LPS诱导脾淋巴细胞增殖试验;苏木素伊红染色(hematoxylin and eosin,HE)切片观察FAC对辐射造成损伤的保护作用。②采用H2O2 / Fe2+体系通过Fenton反应产生羟自由基,邻苯三酚自氧化系统产生超氧阴离子自由基;采用分光光度法观察FAC清除超氧阴离子自由基、羟基自由基和DPPH自由基的清除率及抑制线粒体肿胀和抑制红细胞溶血的作用;组织匀浆法检测辐射小鼠肝脏中的超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量和总抗氧化能力(T-AOC)的活力;Western Blot法观察FAC对辐射小鼠肝脏中的核因子信号转导途径的影响。③吉姆萨染色法观察辐射小鼠骨髓微核率的变化;利用吸光度测量辐射小鼠骨髓DNA含量的变化,观察FAC对受损细胞核的影响;通过单细胞凝胶电泳观察FAC对H2O2氧化损伤的大鼠肝细胞株BRL中DNA链的保护作用。 结果:①FAC提高受辐射小鼠21 d存活率到100 %,延长受辐射小鼠的存活时间;升高辐射小鼠外周血中的白细胞数、红细胞数、血小板数和血红蛋白数; FAC给药组小鼠的T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖能力高于模型组的增殖能力;FAC给药组的小鼠脾脏和胸腺指数对比模型组显著增加,免疫器官的损伤降低;HE切片结果显示辐射后肝细胞失去正常的索状结构。肝细胞肿胀,发生脂肪变性,严重者肝细胞出现坏死,坏死的细胞核浓缩、碎裂、溶解,淋巴细胞和中性粒细胞浸润。FAC治疗组肝细胞的索状结构清楚,肝窦较正常,肝细胞呈轻微的颗粒变性,细胞坏死程度不明显。②FAC能显著升高SOD和GSH-Px的含量,可以抑制MDA的含量,恢复机体的总抗氧化能力;FAC的超氧阴离子自由基、羟基自由基的清除率达到60%以上,对DPPH自由基的清除率为90%;对线粒体肿胀和红细胞溶血的抑制率均达到50%以上;Western Blot结果显示FAC可提高受辐射小鼠肝脏中NF-κB抑制蛋白IκB-α的蛋白表达水平,降低NF-κB蛋白家族成员p65的蛋白表达水平,提示FAC使氧自由基激活的核因子通路受阻。③FAC显著降低受辐射损伤小鼠的骨髓微核率,提高DNA含量,单细胞凝胶电泳显示FAC给药后受损的BRL细胞的彗尾状DNA溢漏现象明显减轻, FAC有保护DNA链的作用。 结论:FAC明显减轻辐射对小鼠的损伤,其作用机制与提高机体抗氧化能力和保护细胞核的DNA有关。