桑叶的抑菌作用及其活性物质的提取分离研究

本课题主要对桑叶提取物的抑菌活性进行了研究,包括抑菌谱及最低抑菌浓度的确定,优化抑菌活性物质的提取工艺,探讨了抑菌活性物质的稳定性并进一步对抑菌活性物质进行分离纯化和成分粗测。最后对桑叶提取物作了一些应用研究。 将桑叶用水和70%乙醇分别提取后,用滤纸片法和平板计数法进行抑菌实验,得到抗菌谱。采用线性回归法快速准确的得出它们对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度。乙醇提取物对金黄色葡萄球菌的MIC:0.43%,对大肠杆菌的MIC:0.055%;桑叶水提取物对金黄色葡萄球菌的MIC:0.86%;对大肠杆菌的MIC:1.54%。可见桑叶乙醇提取物对两种代表性细菌的抑菌效果优于水提取物。 采用单因素实验确定桑叶抑菌活性物质提取最佳条件为:乙醇浓度70%(V/V)、提取温度70°C、提取时间4h、液料比(W/V)1:30。采用正交实验,得出最佳工艺条件为乙醇浓度70%,提取温度70°C,提取时间6h,液料比1:40。此条件下,桑叶提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为8.81mm。 对桑叶提取物抑菌活性做了稳定性测试,结果表明桑叶提取物的抑菌活性具有较好的热稳定性,对紫外光照射稳定。对菌体的抑制能力随pH值的升高而有所下降,其中酸性条件下抑菌活性较强,在pH6-7之间,缓冲液对提取物的抑菌活性没有影响,并且提取物的抑菌效果好。 对活性物质进一步分析,首先将桑叶提取物分为石油醚部、二氯甲烷部、乙酸乙酯部、正丁醇部和水部等不同极性溶剂萃取物,经抑菌活性比较,确定乙酸乙酯部的抑菌活性最强,正丁醇部次之。乙酸乙酯部经薄层层析,展开后,有多个斑点,用1%的AlCl3显色,多个点显示黄色,紫外灯光下显黄绿色和棕色。推断抑菌组分属于黄酮类化合物。乙酸乙酯部分上聚酰胺和硅胶柱分离,得到抑菌效果最好的组分,薄层层析,发现三个清晰的斑点,Rf值分别0.20,0.27,0.72。桑黄素的Rf值为0.27,通过HPLC验证桑黄素是桑叶抑菌有效成分之一。 把桑叶提取物加入到化妆品中作测试,结果表明桑叶提取物具有很好的防腐、美白、保湿效果,可以在化妆品中广泛应用。