呋喃唑酮代谢物胶体金免疫层析试纸条的研制

硝基呋喃类药物是一类人工合成的抗生素，因价格低廉，被广泛用于水产品的病害防治。硝基呋喃类药物半衰期很短，在动物体内代谢迅速，且其代谢物可在机体内稳定存在。硝基呋喃类药物的残留严重威胁到人体的健康，因此，世界各国均把硝基呋喃类药物列为禁用渔药。 目前，用于检测硝基呋喃类代谢物的常用方法为LC-MS/MS，但这种方法需要昂贵的仪器，且前处理复杂，成本高、分析时间又长，不利于现场分析。而免疫层析分析法具有省时、高效、成本低等优点，而且检测结果重现性好，非常适用于现场检测和大批量筛查。本研究旨在研制出呋喃唑酮代谢物胶体金免疫层析试纸条，初步建立呋喃唑酮代谢物残留的免疫层析快速检测方法，为商用化试纸条的开发提供方法依据。 首先实验对制备胶体金的方法进行了优化，采用三种还原方法来制备胶体金，对比制备的胶体金性能参数，选择最优的还原方法。实验选择柠檬酸三钠还原制备胶体金，制备的胶体金粒径为18nm左右。 利用上述方法制备的胶体金来标记AOZ单克隆抗体，制备金标探针，再将AOZ人工合成抗原（CPAOZ-BSA）和羊抗鼠二抗（IgG）分别包被在硝酸纤维素膜的T线和C线处，组装成胶体金免疫层析试纸条。单抗的最佳标记量为7.8μg/mL，单抗标记最佳的pH为9.0，抗原的最佳包被浓度为1.0mg/mL，二抗的最佳包被浓度为1.0mg/mL，金标抗体的最佳稀释倍数为2倍稀释，胶体金免疫层析试纸条的目测检测限为80ng/mL。 试验研究了几种硝基呋喃类代谢物（AOZ）的结构类似物对试纸条的特异性，实验结果显示：试纸条对SEM、CPSEM、AHD、CPAHD等均不发生交叉反应性。 试纸条检测方法操作简单，稳定性较高，适用于呋喃唑酮代谢物残留的现场初步筛选，也为其他兽药残留试纸条的制备提供借鉴。