核桃叶、青皮中黄酮类化合物的初步分离及其活性研究

本研究通过提取核桃叶、青皮中黄酮类化合物,进行大孔吸附树脂富集其黄酮化合物的条件优化,并对得到的总黄酮进行抗病活性研究,选用核桃青皮总黄酮进行初步分离。研究结果如下: （1）绘制了紫外分光光度法测定核桃叶、青皮总黄酮含量的标准曲线: Y=0.1335+0.0001X,r=0.9996。 （2）以总黄酮回收率为考察指标,通过6种不同型号的树脂对核桃叶、青皮总黄酮静态、动态吸附解吸实验,确定LS303型、D101型分别为核桃叶总黄酮、青皮总黄酮分离纯化的适宜大孔树脂;LS303型大孔树脂分离纯化核桃叶总黄酮的最佳工艺条件为:上柱黄酮量与干树脂之比为1:8,浓度约为4.67 mg.mL-1,pH为6,4BV（BV表示柱床体积,下同）的水洗后用4BV的70%乙醇洗脱。经LS303处理后的核桃叶总黄酮回收率在80%以上,纯度可达70%以上。D101型树脂最佳工艺条件为:上柱总黄酮量与干树脂之比为1:12,上样液质量浓度可在3.087 5～6.175 mg.mL-1范围内,pH值为5,6BV的水洗后用5BV的70%乙醇洗脱。经D101处理后的核桃青皮总黄酮回收率在60%以上,纯度可达80%以上。 （3）通过确定的大孔树脂分离纯化核桃叶、青皮总黄酮的工艺参数,进行了工艺放大实验,该纯化工艺有较好的重现性,且具有收率高、成本低、操作简便、溶剂安全等特点,适宜在大规模生产中选用。 （4）经大孔树脂纯化后的核桃叶、青皮总黄酮(浓度10mg.mL-1)对烟草花叶病毒（TMV）侵染心叶烟的抑制率分别为77.52%、79.8%。除叶总黄酮对稻瘟病病原菌有促进作用外,核桃叶、青皮总黄酮对5种供试病原真菌只有较弱的抑制作用,相较而言,青皮中总黄酮对梨黑星病原菌和油菜菌核病原菌的抑制率较高,分别为42.96%和40.75%。核桃叶、青皮总黄酮样液对7种供试细菌有不同程度的抑制作用,核桃青皮总黄酮对金色葡萄球菌、灵杆菌、北京棒状杆菌有较强的抑制作用,叶总黄酮对变形杆菌、枯草杆菌的抑制作用较弱。不同浓度核桃叶、青皮总黄酮对7种细菌有不同程度的抑制作用。核桃青皮总黄酮无论是在抑制TMV侵染心叶烟,还是抑制病原真菌、细菌生长方面,其抑制效果都较核桃叶总黄酮的抑制效果显著。 （5）核桃青皮总黄酮经聚酰胺柱层析分离,共得到18个组分,其中9个组分具有黄酮化合物的特征颜色反应,17～20号瓶合并得到的组分,经反复重结晶得到1个白色针状结晶。定性检测显示:该化合物具有黄酮类物质的典型反应,纯度检验显示该化合物为单体化合物。