抑郁症肝郁脾虚证大鼠海马TPH2与IDO1的变化及逍遥散的调节机制

研究背景:抑郁症是一种常见的慢性精神疾患,可造成包括中枢神经系统在内的机体多个系统功能的损伤,严重影响人的身心健康,抑郁症中最常见的中医证候类型为肝郁脾虚证。目前,抑郁症的发病机制以及肝郁脾虚证的证候基础仍未完全清楚,5-HT系统的功能改变与抑郁症的发病的关联性也一直被广泛研究。因此,作为影响5-HT合成的关键物质,TPH2与IDO1的表达改变能作为抑郁症发病机制的研究位点。研究目的:本课题通过慢性束缚应激的方法复制抑郁症肝郁脾虚证大鼠模型,从动物的一般状态、行为改变以及客观指标等方面对大鼠病证结合模型模型进行评价。探索5-HT系统的变化与抑郁症肝郁脾虚证中枢机制的联系,同时阐释中药复方逍遥散的调节作用,为临床上逍遥散治疗抑郁症提供实验依据。研究方法:选用成年雄性SD大鼠48只,随机分为4组,每组12只,分别为:正常组、模型组、逍遥散组、氟西汀组。将大鼠分组后先适应性喂养7天,然后采用慢性束缚应激方法制备抑郁症肝郁脾虚证大鼠模型,造模持续21天。实验期间观察造模期间各组大鼠的一般状态、进食量、体重变化情况,运用糖水偏好实验、新环境抑制进食实验、旷场实验对大鼠行为进行评价;称取相同重量的海马组织进行ELISA检测,测定海马中色氨酸与5-HT的含量;分离大鼠海马组织,采用实时荧光定量PCR和Western blot的方法观察各组大鼠海马TPH2和IDO1的基因蛋白表达变化。结果:从宏观状态上看,模型组大鼠表现出了明显的抑郁样变化,模型组大鼠的进食量与体重明显低于正常组(P<0.01),而逍遥散组与氟西汀组大鼠的进食量和体重和正常组无明显差异。在糖水偏好实验中,模型组大鼠的糖水偏好量明显低于正常组、逍遥散组和氟西汀组大鼠(P<0.01);在新环境抑制进食实验中,模型组大鼠的进食时间明显长于正常组(P<0.01),且逍遥散组和氟西汀组与模型组无明显差异;模型组大鼠的中央区进入次数和总穿格次数均明显低于正常组大鼠(P<0.01),并且模型组大鼠中央区停留时间也明显高于正常组大鼠(P<0.01),逍遥散组大鼠的中央区进入次数、中央区停留时间以及总穿格次数与模型组大鼠差异明显(P<0.05,P<0.01)。模型组大鼠海马5-HT的含量明显低于正常组大鼠(P<0.05),逍遥散组与氟西汀组大鼠海马5-HT的含量显著大于模型组(P<0.01);模型组大鼠海马色氨酸含量明显高于正常组、逍遥散组和氟西汀组大鼠(P<0.01),并且色氨酸的含量在正常组、逍遥散组与氟西汀组三组之间无统计学差异。模型组、逍遥散组与氟西汀组大鼠海马TPH2基因的表达水平明显低于正常组(P<0.05),且三组之间无统计学差异;模型组大鼠海马IDO1基因的表达水平明显高于正常组、逍遥散组与氟西汀组(P<0.01),且正常组、逍遥散组、氟西汀组之间无明显差异。与正常组相比,模型组、逍遥散组、氟西汀组3组大鼠海马TPH2的蛋白的表达明显减少(P<0.01),且逍遥散组TPH2蛋白表达高于模型组和氟西汀组(P<0.05);相比于正常组、逍遥散组、氟西汀组,模型组大鼠海马IDO1的蛋白表达明显增加(P<0.01),正常组、逍遥散组与氟西汀组三组之间无统计学差异。结论:本研究通过慢性束缚应激的方法,成功复制了抑郁症肝郁脾虚证病证结合大鼠模型。模型组大鼠海马TPH2基因和蛋白含量降低,IDO基因及蛋白含量升高,影响了色氨酸的代谢和5-HT的生成,这表明抑郁症的发病机理可能与TPH2与IDO1的表达变化有关,并且逍遥散对TPH2与IDO1的表达具有一定的调节作用。