陈皮（Citri Reticulatae Pericarpium）为芸香科柑桔属植物橘（Citrus reticulataBlanco）及其栽培变种的干燥成熟果皮，是一种药食同源的中药。陈皮气香，微苦，主治脘腹胀满，食少吐泻，咳嗽痰多等症。药理学研究表明，陈皮在心血管系统、免疫、抗氧化以及抗肿瘤等方面具有良好的药用价值。
陈皮的化学成分以黄酮类化合物为主，此外还含有柠檬苦素类、生物碱类、挥发油类及微量元素等。
本实验对陈皮的化学成分进行了研究，从陈皮80%乙醇提取物中共分得十二个单体化合物，经结构鉴定，确认了其中十个化合物的化学结构，它们分别是：5,6,7,8,4′-五甲氧基黄酮，3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮，柠檬苦素，Limonexic acid，8-羟基-3,5,6,7,3′,4′-六甲氧基黄酮，6,7,8,4′-四甲氧基黄酮，5-羟基-3,7,3′,4′-四甲氧基黄酮，3,6,7,8,2′,5′-六甲氧基黄酮，5,4′-二羟基-3,6,7,8,3′-五甲氧基黄酮，5-羟基-3,6,7,8,3′,4′-六甲氧基黄酮。其中8-羟基-3,5,6,7,3′,4′-六甲氧基黄酮，5,4′-二羟基-3,6,7,8,3′-五甲氧基黄酮为首次从陈皮中分得。
本实验还建立了陈皮中3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮、8-羟基-3,5,6,7,3′,4′-六甲氧基黄酮和5-羟基-3,6,7,8,3′,4′-六甲氧基黄酮RP-HPLC-DAD的含量测定方法。
一、陈皮的提取、分离和结构鉴定
1、提取
将干燥的陈皮药材5.0kg粉碎，用80%乙醇回流提取三次，乙醇用量分别为50、40、30L，提取时间分别为1.5、1.0、1.0h，过滤后，合并提取液，减压回收溶剂得到陈皮提取物0.5kg。
2、分离和纯化
将0.5kg的提取物进行硅胶柱层析分离，以流动相I洗脱，得到A、B、C、D、E五个部分。
C部分采用硅胶柱层析分离，以流动相II洗脱，得到F和G两部分。F再进行硅胶柱层析，以流动相IV洗脱，得到J部分，然后再经过流动相V洗脱，得到化合物CP-4（500mg）。G部分进行硅胶柱层析，流动相VI洗脱，得到K和L部分。 L部分经硅胶柱层析分离，以流动相VIII洗脱，得到化合物CP-3（1.5g）和CP-11（12mg）。而K部分进行硅胶柱层析，以流动相VII洗脱得到N和O部分，再分别经过ODS柱层析分离，流动相分别为IX和X，得到CP-1（2.0g）、CP-2（1.8g）、CP-5（15mg）和CP-8（20mg）四个化合物。D部分进行硅胶柱层析分离，以流动相III洗脱，得到H和I两个部分。其中I部分经过ODS柱层析，以流动相XI洗脱，得到化合物CP-12（50mg）。H部分利用ODS柱层析，流动相XI洗脱得到化合物CP-6（14mg）、M部分和P部分， M部分再通过ODS柱层析，流动相X洗脱后得到化合物CP-9（16mg）和CP-7（26mg），P部分经过重结晶得到CP-10（15mg）。
3、结构鉴定
根据各化合物的理化性质，经核磁共振和质谱等波谱数据分析并与文献对照，鉴定了十个化合物的化学结构，结果如下：化合物CP-1为5,6,7,8,4′-五甲氧基黄酮，化合物CP-2为3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮，化合物CP-3为柠檬苦素，化合物CP-4为8-羟基-3,5,6,7,3′,4′-六甲氧基黄酮，化合物CP-5为6,7,8,4′-四甲氧基黄酮，化合物CP-6为5-羟基-3,7,3′,4′-四甲氧基黄酮，化合物CP-8为3,6,7,8,2′,5′-六甲氧基黄酮，化合物CP-9为5,4′-二羟基-3,6,7,8,3′-五甲氧基黄酮，化合物CP-11为limonexic acid，化合物CP-12为5-羟基-3,6,7,8,3′,4′-六甲氧基黄酮。
二、RP-HPLC-DAD法测定陈皮中三种多甲氧基黄酮的含量
1、仪器和色谱条件高效液相色谱仪：Agilent1200HPLC-DAD检测器天平：METTLER TOLEDO AB135-S色谱柱：Cosmosil packed column C18-Ar-II （4.6×250mm，5μm）色谱条件：流动相：乙腈-水（0.2%醋酸）（梯度：0-30min，39%乙腈；30-33min，39-52%乙腈；33-45min，52%乙腈）流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：258nm；进样量：20μL。
2、方法学考察
2.1线性关系
化合物CP-2、CP-4和CP-12分别在0.01～10.0μg、0.05～10.0μg和0.025～5.0μg的范围内峰面积（Y）和进样浓度（X）均呈现良好的线性关系。它们的线性回归方程和相关系数分别为：CP-2：Y=23606X+40.533，r=0.9996；CP-4：Y=26996X-31.177，r=0.9997；CP-12：Y=17519X+0.8356，r=0.9999。
2.2检测限和定量限
当化合物CP-2的浓度分别降至7.5×10-6mg/mL和1.0×10-4mg/mL时，信噪比S/N分别为3.8和10.0，因此CP-2的检测限为1.5×10-4μg，定量限为2.0×10-3μg。
当化合物CP-4的浓度分别降至5.0×10-4mg/mL和1.25×10-3mg/mL时，信噪比S/N分别为3.2和11.6，因此CP-4的检测限为1.0×10-2μg，定量限2.5×10-2μg。
当化合物CP-12的浓度分别降至5.0×10-5mg/mL和2.5×10-4mg/mL时，信噪比S/N分别为3.2和10.9，因此CP-12的检测限为1.0×10-3μg，定量限5.0×10-3μg。
2.3精密度
将化合物CP-2、CP-4和CP-12混合对照品溶液按上述色谱条件进行测定，结果显示化合物CP-2峰面积的日内和日间精密度的RSD值分别为0.69%和0.63%，化合物CP-4峰面积的日内和日间精密度的RSD值分别为1.29%和1.18%，化合物CP-12峰面积的日内和日间精密度的RSD值分别为1.05%和1.42%。RSD值均小于2%，表明仪器精密度良好。
2.4重复性
测定六份供试品溶液，结果显示化合物CP-2、CP-4和CP-12含量的RSD值分别为0.89%、1.21%和0.96%，均小于2%，表明重复性良好。
2.5稳定性
将供试品溶液每间隔2h测定一次，连续12h，结果显示这三个化合物峰面积的RSD值分别为0.49%、0.71%和1.13%，保留时间的RSD值分别为0.09%、0.16%和0.11%，各RSD值均小于2%，表明供试品溶液在12h内稳定性良好。
2.6加样回收率
化合物CP-2、CP-4和CP-12的平均加样回收率分别为99.72%、101.78%和100.22%，回收率的RSD值依次分别为0.50%、1.97%和1.75%，其RSD值均小于2%，表明回收率良好。
3、含量测定
陈皮药材中化合物CP-2、CP-4和CP-12的平均含量分别为0.08%、0.01%和0.0025%。
4、总结
本论文在国内外学者研究的基础上，对陈皮药材的化学成分进行了深入研究，共分离十二个化合物，鉴定了十个化合物，其中两个为首次从陈皮中分得。此外，本文还建立了陈皮中三种多甲氧基黄酮含量的RP-HPLC-DAD测定方法，为完善陈皮药材的质量标准，以及陈皮的开发利用和药理活性的进一步研究提供新的科学依据。
