高产蛋白酶菌株UF366米曲霉的选育及发酵条件的研究

本论文通过对沪酿米曲霉3042进行原生质体的制备,用紫外线、LiCl 复合诱变,得到产蛋白酶活力较高的菌株UF366米曲霉,对该菌株的培养基和发酵条件及蛋白酶性质进行了研究。 本论文对影响原生质体的制备和再生条件,包括菌龄、水解酶液的浓度、酶解温度、酶解时间、再生培养基的稳渗剂、紫外线的照射时间进行了研究。结果表明:采用2%纤维素酶和2%蜗牛酶混合液,菌龄为10小时,酶解温度为30℃,酶解时间为90分钟,用0.8mol/lNaCl溶液作稳渗剂,原生质体的形成数为7×106个/ml,原生质体的再生率为27.8%。 确定诱变条件为:紫外线照射用30W 紫外灯,距离为28cm,照射时间为60s,LiCl浓度为0.8%。复合诱变之后,挑选单菌落100 个,从中筛选出一株蛋白酶活力高的菌株UF366,其中性蛋白酶活较出发菌株提高了33%。 确定种子培养基为麸皮、面粉、水;制曲的培养基为豆粕、麸皮、水,比例为豆粕∶麸皮∶水=6∶4∶5;最佳发酵条件为培养温度为33℃、培养时间32 小时、翻曲2 次、接种量4‰。 经过斜面传代20 次,UF366 米曲霉菌株的遗传稳定性较好。 中性蛋白酶活力的最适pH 和最适温度分别为7.2 和40℃,在90℃处理30 分钟,蛋白酶活力完全丧失。 发酵实验结果:氨基酸态氮和全氮分别较出发菌株提高了36.7%和39%,在大生产过程中还需要进一步反复试验。